医学论文-杆状病毒转导的小鼠羊水干细胞保持成骨分化潜能的实验研究

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1、医学论文-杆状病毒转导的小鼠羊水干细胞保持成骨分化潜能的实验研究【摘要】 目的探讨带有绿色荧光蛋白基因的重组杆状病毒修饰后的小鼠羊水干细胞(mouseamnioticfluidstemcells,mAFSs)是否仍保持成骨分化潜能。方法体外原代培养小鼠羊水干细胞，并进行成脂成骨诱导分化，鉴定多向分化潜能；体外构建并扩增重组杆状病毒（Baculovirus-CMV-GFP,Bv-GFP）；Bv-GFP体外转导小鼠羊水干细胞，流式细胞仪检测其转导效率；经Bv-GFP基因修饰后的小鼠羊水干细胞进行成骨诱导分化。结果小鼠羊水干细胞体外具有良好的增殖能力，3代后的细胞呈现较

2、均一的梭形、漩涡状生长，且小鼠羊水干细胞体外具有成脂成骨分化潜能。体外成功构建重组杆状病毒，经Sf9细胞扩增后，极度稀释法测定其滴度可达109v.g/ml；Bv-GFP体外可较有效转导小鼠羊水干细胞，其转导效率为52.85％，且经Bv-GFP基因修饰后的小鼠羊水干细胞仍保持成骨分化潜能。结论小鼠羊水来源干细胞是一种理想的干细胞，杆状病毒是一种新型病毒基因载体，体外能较有效转导小鼠羊水干细胞且不改变其成骨分化潜能。经重组杆状病毒基因修饰的羊水干细胞会为今后的骨组织工程提供一种新的治疗模式。【关键词】 杆状病毒羊水细胞基因修饰成骨分化【Abstract】 Object

3、ive Toexplorewhetherthemouseamnioticfluidstemcells(mAFSs)maintainthepotentialofosteogenesisdifferentiationaftergenemodificationbygreenfluorescentprotein(GFP)labeledbaculovirus.Methods mAFSswereprimaryculturedinvitroandwereinducedforosteogenicandadipogenicdifferentiation,themulti-direc

4、tionaldifferentiationwasidentified.Baculovirus-CMV-GFP(Bv-GFP)wasconstructedandamplified,thenitwastransfectedtomAFSs,thetransfectionefficiencywastestedbyflowcytometer;osteogenicdifferentiationwasinducedonthetransfectedstemcells.Results ThemAFSshadgoodproliferationcapacity,cellswerehom

5、ogeneouslyspindle-shapedafter3generationsandgrewinwhirlpoolmanner,alsotheyhadosteogenicandadipogenicdifferentiationpotential.Thereconstructedbaculoviruswassuccessfullyconstructed,afterSf9amplification,thetilterwas109v.g/mlafterextremedilutionmethod；Bv-GFPcouldeffectivelytransfectedmAF

6、Ss,withthetransfectingrateat52.85%,andremainedosteogenicanddifferentiationpotentialaftergenemodification.Conclusions mAFSsareidealstemcells,baculovirusisanewtypeofviralgeneticvector,whichcaneffectivelytransfectmAFSswithoutchangingtheosteogenicdifferentiationpotential.MAFSs,aftergeneti

7、callymodifiedbyreconstructedbaculovirus, providesanewtreatingmodeforbonetissueengineering.   【Keywords】 Baculovirus Amnioticfluidstemcell Genemodification Differentiationofosteogenesis   外伤或手术时造成的骨损伤如不能自行修复，则会造成骨不愈合或骨缺损,常需自体或异体骨移植，但其效果并不确切,不但增加了病人的痛苦和经济负担，同时又存在许多并发症［1］。若在骨损伤的部位注入有成骨潜能

8、的细胞并诱