去分化间充质干细胞再成骨分化潜能研究

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1、SOOCHOWUNIVERSITY硕士学位论文论文题目去分化间充质干细胞再成骨分化潜能研究研究生姓名张慧导师姓名施勤谢芳专业名称病理学与病理生理学研究方向干细胞与组织工程论文提交日期2013年4月细菌纤维素的生物相容性及联合BMP2的成骨效应中文摘要中文摘要第一部分：去分化间充质干细胞的诱导及生物学特性目的：诱导去分化间充质干细胞(De-differentiatedmesenchymalstemcell,De-MSCs)，研究其生物学特性，为全面研究De-MSCs提供物质基础。方法:从健康成人骨髓中分离培养出间充质干细胞（Mesenchymalstemcell,MSCs）

2、，经流式细胞仪(FACS)表型鉴定后采用更换培养基方法诱导去分化间充质干细胞(De-MSCs)，观察De-MSCs形态学变化，FACS检测De-MSCs细胞表型，cck8（Cellcountkit，CCK）检测比较MSCs和De-MSCs增殖效率差异。结果：De-MSCs形态上回复到MSCs样长梭形，流式细胞仪分析结果显示De-MSCs表达MSCs某些干细胞表面标志，cck8法检测细胞增殖率表明De-MSCs相比MSCs有较高增殖效率。结论：De-MSCs在形态和干细胞表面标志表达上与MSCs一致，但是增殖能力更强，为MSCs样细胞。第二部分：去分化间充质干细胞体外再成骨

3、潜能分析目的：研究人骨髓来源的去分化间充质干细胞(De-MSCs)在体外再次成骨分化潜能和效率，探讨De-MSCs潜在临床应用价值。方法:将MSCs和De-MSCs同时成骨诱导7天成为MSCs-ob和De-MSCs-ob，分别采用实时定量PCR（qPCR）检测成骨相关基因，21天后采用碱性磷酸酶（ALP）活性检测、茜素红染色法和形态学观察检测比较De-MSCs和MSCs成骨分化效率。结果：qPCR显示De-MSCs成骨相关基因BMP2,Runx2,DLX5,Osterix,Beta-c表达较MSCs明显增强，ALP活性检测与茜素红染色显示De-MSCs具有较强成骨能力。结

4、论：体外研究显示De-MSCs再次成骨分化效率较高，为其临床应用提供实验依据，为满足临床和组织工程需要提供更适宜的种子细胞。I中文摘要细菌纤维素的生物相容性及联合BMP2的成骨效应第三部分：去分化间充质干细胞体内再成骨潜能分析目的：去分化间充质干细胞(De-MSCs)作为优质种子细胞是目前组织工程和再生医学领域研究的热点。本实验根据De-MSCs体外再次成骨分化的结果，研究De-MSCs体内再次成骨分化潜能，评估De-MSCs在骨组织工程中的潜在应用价值，为进一步的临床应用提供实验依据。方法：将De-MSCs和MSCs按照相同的浓度种植在胶原模块上，置成骨培养基诱导4小时

5、后将负载细胞的移植胶原模块入重症联合免疫小鼠(SCID)皮下进行体内异位成骨实验，分别于7天和28天进行qPCR、碱性磷酸酶ALP活性检测和HE组织切片，免疫组化观察。结果：qPCR检测分析显示De-MSCs较MSCs的成骨相关基因表达水平(BMP2,Runx2,DLX5,Osterix,Beta-c)高，且碱性磷酸酶ALP活性检测结果显示De-MSCs再成骨组较MSCs成骨组高（p<0.05），表明De-MSCs在体内成骨分化的效率较MSCs高。HE组织切片结果可见明显成骨现象，免疫组化结果见骨组织中成骨细胞胞膜II型胶原阳性表达。结论：De-MSCs具有更强的成骨分化

6、潜能，可作为骨组织工程优质种子细胞进行进一步的研究，为再生医学的应用提供更加丰富的理论依据和实验基础。关键词：间充质干细胞(MSCs)，去分化间充质干细胞(De-MSCs)，成骨分化，成骨再分化，组织工程作者：张慧指导老师：施勤副教授谢芳副教授II去分化间充质干细胞再次成骨分化潜能研究英文摘要ImprovedosteogenicdifferentiationpotentialofDe-defferentiationMesenchymalStemCellsAbstractPartITheinductionofDe-differentiatedmesenchymalstemc

7、ellsanditsbiologicalcharacteristicsObjective:ToinvestigatebiologicalcharacteristicsofDe-differentiatedmesenchymalstemcells(De-MSCs).Methods:Mesenchymalstemcells(MSCs)werepreparedfromthebonemarrowofhealthyadults.De-MSCsweredevelopedbywithdrawingthegrowthfactorsincell