成骨分化的人脐血间充质干细胞免疫原性研究

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1、万方数据答辩委员会主席：过之丝答辩委员会成员：奎垂塑菇d谚协对Vly里玺圄叁必墅万方数据缩略语表缩略语英文全称中文全称UCB．MSCsUmbilicalcordbloodmesenchymal脐血间充质干细胞stemcellsIFN一丫Interferon—YY干扰素HLAHumanleukocyteantigen人类白细胞抗原CDClusterofdifferentiation分化群3H．TdR3H-thymidine氚标记胸腺嘧啶核苷ELISAEnzyme-linkedimmunosorbentassay酶联免疫法IL．2Interleukin一2白细胞介素一2BM．MSCsBon

2、emarrowmesenchymalstemcells骨髓间充质干细胞HSCsHematopoieticstemcells造血干细胞MHCMajorhistocompatibilitycomplex主要组织相容性复合体PBSPhosphatebufferedsaline磷酸缓冲液DMEMDulbecco’Smodifiedeagle’Smedium改良eagle培养基FBSFetalbovineserum胎牛血清EDTAEthylenediaminetetraaceticacid乙二胺四乙酸FCMFlowcytometry流式细胞仪PBMCsPeripheralbloodmononuc

3、learCells外周血单个核细胞CPMCountsperminute每分钟3H—TdR摄入量PHAPhytohaemagglutinin植物血凝素万方数据MLRMixedlymphocytereaction淋巴细胞混合反应OPOsteopontin骨调素0CN0steocalcin骨钙素GVHDGraft．versus．hostdisease移植物抗宿主病Th细胞HelperTcell辅助性T细胞NKNaturalkillercelI自然杀伤细胞CTLCytotoxicT-lymphocyte细胞毒性T细胞LAKLymphokineactivatedkillercells淋巴因子激活

4、的杀伤细胞万方数据目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．4前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．7材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．10结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．18分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．24d、结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．29参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3o附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．32致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．35综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．36学位论文独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．54万方数据温州医科大学硕士学位论

5、文成骨分化的人脐血间充质干细胞免疫原性研究硕士研究生：林和敏导师：叶信海教授温州医科大学附属眼视光医院，浙江温州，325027中文摘要目的(1)通过观察体外培养人脐血间充质干细胞(Umbilicalcordblood．mesenchymalstemcells，UCB．MSCs)并作诱导成骨分化，探讨其作为组织工程的骨种子细胞的可行性。(2)通过建立混合淋巴细胞反应体系模拟成骨分化的UCB．MSCs移植入体内的免疫微环境条件，并观察在不同免疫微环境条件下成骨分化的UCB．MSCs免疫相关膜蛋白的表达与可溶性细胞因子的分泌水平，研究成骨分化UCB．MSCs产生免疫原性的相关机制。方法体外分

6、离培养UCB．MSCs，流式细胞仪检测细胞表面抗原的表达及其变化规律；体外成骨诱导人UCB．MSCs2周，采用AlizarinRed染色和钙离子半定量测定的方法评价细胞成骨活性。取P2代UCB．MSCs细胞，流式细胞仪检测加入IFN吖前后的HLA．I、HLA．II、CD40、CD80等分子的表达情况；流式细胞仪检测UCB．MSCs在成骨诱导分化前后HLA—I类分子、HLA．II类分子的表达情况以观察成骨诱导分化的MSCs免疫抗原性的变化。体外分离外周血T淋巴细胞，成骨分化与未分化的UCB—MSCs分别与淋巴细胞共培养，模拟移植入宿主体内的未激活状态的免疫微环境，3H—TdR掺入法检沏J

7、JIFN一丫刺激日订后的异体淋巴细胞增殖情况，以评测成骨分化前后的UCB．MSCs对异体淋巴细胞增殖的影响。建立隔离万方数据温州医科大学硕士学位论文腔(Transwell)非接触共培养混合淋巴细胞反应体系，评价成骨诱导分化前后的UCB-MSCs对淋巴细胞增殖反应的影响。ELISA定量检测培养上清中IFN吖和IL-4的含量，观察成骨诱导分化的UCB—MSCs对IFN—V、IL．4分泌水平的影响。结果第l、3、5代细胞的CD29、CDl05和CDl