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《脐血间充质干细胞的分离扩增及向成骨及脂肪细胞的分化》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、中国修复重建外科杂志2007年第21卷第1期·81·脐血间充质干细胞的分离扩增及向成骨及脂肪细胞的分化112211113田新符仁义邓力智伟周晨燕郭霞朱易萍雷明雨李世均【摘要】目的探讨新生儿脐血间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)体外分离、纯化、扩增,以及向成骨及脂肪细胞定向诱导分化的方法与条件。方法无菌条件下收集新生儿脐血60～120ml,枸橼酸钠抗凝,以Fi2+coll2Hypaque淋巴细胞分离液密度梯度法、沉降红细胞后密度梯度法及CD34免疫磁珠负选法分离单个核细胞(mononuclearcells,MNCs)TM。分离获得的MNCs采用L2DMEM
2、培养基或Mesencult培养基ö10%胎牛血清进行MSCs培养传代,获得第3代集落生长细胞作流式细胞仪表面抗原测定,并向成骨及脂肪细胞定向诱导分化,成骨细胞钙沉积TM经茜素红染色鉴定,脂肪细胞胞浆油滴经油红染色鉴定。结果经沉降红细胞后分离的MNCs,使用Mesencult培养基ö10%胎牛血清培养成功率高,第3代可出现明显的集落生长,而另两种方法分离培养的细胞则难以形成集落;集落细胞表面抗原测定表达CD29、CD59、CD71而不表达CD34、CD45及HLA2DR等分子。成骨定向诱导分化的集落细胞经茜素红染色胞浆中出现有大量的钙沉积;成脂肪定向诱导分化的集落细胞油红染色示胞浆充满油
3、滴空泡。结论新生儿脐血中可分离出MSCs,并可在体外进行培养扩增。以甲基纤维素沉降红细胞后密度梯度离心分离的MNCs培养较为有效,集落细胞表达基质细胞表面抗原,能够向成骨细胞及成脂肪细胞定向诱导分化。【关键词】新生儿脐血间充质干细胞诱导分化中图分类号:Q813.1R318文献标识码:AMETHODANDCONDITIONSOFISOLATIONANDPROLIFERATIONOFMULTIPOTENTMESENCHYMALSTEMCELLSöTIANXin,FURenyi,DENGLi,etal.WestChinaSecondHospital,SichuanUniversity,Che
4、ngduSichuan,610041,P.R.ChinaCorrespondingauthor:FURenyi,E2mail:ryf666@126.com【Abstract】ObjectiveToinvestigatethemethodandconditionsofisolation,proliferationofmultipotentmes2enchymalstemcells(MSCs)fromhumanumbilicalcordbloodinvitro,andtoinduceosteogenicandadipogenicdifferenti2ationdirectlyforiden
5、tification.MethodsHumanumbilicalcordbloodwascollectedinasepsiscondition,isolatedbydensitygradientcentrifugation,orsedimentedredcellwithmethylcellulose,andthenthesamecentrifugationwasdone,+orobtainedbynegativeimmunodepletionofCD34.Theseisolatedmononuclearcellswereusedtocarryonplasticad2herentcult
6、ure.Toobtainsinglecell2derivedcolonies,thesecellswereproliferatedclonallyinmediumwhichconsistsofTML2DMEMorMesencultmediumand10%fetalcalfserum(FCS)respectively,thentheirdifferentiationpotentialitytoosteoblastsandlipoblastswastested.ResultsThemononuclearcellsisolatedbysedimentedandcentrifugatedway
7、cul2TMturedinMesencultmediumand10%FCSweremostavailable.Theseadhesivecellscouldbecomeobviouslyshortrod2shapeorshuttle2shapecellsafter527days.Thecoloniesformwellin3rd2passagecells.Themononuclearcellsobtainedbyonlycentrifugaliz
