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1、园艺植物生物技术实验指导单位河南科技学院教研室园艺植物遗传育种教研室吋间2008年1月编写说明课程编码：0600017课程教学总学时：36课程实验总学时：10总学分：2适用专业：园艺先修课程：植物学；植物生理学；园艺植物遗传学一、目的与任务实践课堂主要内容，了解牛物技术相关实验设施，掌握牛物技术基本实验操作，培养学生的动手操作能力、分析和解决问题的能力。二、实验教学的基木要求通过本课程的学习了解生物技术实验室的设计、常用仪器设备的基本操作；掌握园艺植物组织培养基木流程及技术，初步掌握以基因工程为核心的相关技术操作。三、实验教学的时数安排总学吋10学吋，各实验学吋数分配见下表：序号实验内
2、容学时实验一培养基母液的配制2实验二培养基的配制与灭菌2实验三无菌操作技术及植物组织培养2实验四园艺植物脱毒技术2实验五园艺植物DNA提取技术2实验一实验一实验一实验一培养基母液的配制一、实验目的通过配制MS培养基母液，掌握贮备液的配制和保存方法。二、实验原理配制培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即按培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱屮保存。使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。以MS培养基为例，所需配制的母液为：大量元素母液(母液I,浓缩20倍)、微量元素母液(母液II,浓缩200倍)、铁盐母液(母液Ill,浓缩
3、200倍)和有机化合物母液(母液IV,浓缩200倍)等。三、主要仪器设备和试剂1.仪器设备：冰箱，天平，酸度计，烧杯(50ml,100ml,500m1,1000ml),量筒(1000ml,100ml,25ml),容量瓶(1000ml,500ml,100ml),磨口试剂瓶(100ml,500ml,1000ml),药勺、称量纸、滴管、玻璃棒，电炉，微波炉2•试剂：NH4NO3,MnSO4.4H2O,KNO3,ZnSO4・7H2O,CaCl2.2H2O,Na2MoO4.2H2O,MgSO4.7H2O,CuSO4.5H2O,KH2PO4,CoC12.6H2O,H2BO3,Na2?EDTA?2H
4、2O,KI,FeSO4.7H2O,烟酸，甘氨酸，盐酸硫胺素，肌醇，盐酸毗哆醇，蒸憾水四、实验方法1.MS人量元素母液的配制配制时先用量筒量取蒸镭水大约350ml,放入500ml的烧杯屮，按照配方表中用量依次分别称取：NH4NO3,KNO3,KH2PO4,MgSO4・7H2O,CaC12.2H2O,待第一种化合物溶解后再加入第二种化合物，当最后一种化合物完全溶解后，将溶液倒入500m1的容量瓶中，用蒸憾水定容至500ml,然后，倒入细口试剂瓶屮，贴上标签，注明母液名称、配制日期、配制人姓名，置于4°C冰箱中保存备用。2.MS微量元素母液的配制按照配方表中用量用电子天平分别依次称取MnSO
5、4?4H2O,ZnSO477H2O,H2BO3,KI,NaMoO4?2H2O,CuSO4?5H2O,CoC12?6H2O,用蒸憾水逐个溶解，待全部溶解后，用容量瓶定容，装入500ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、配制日期、配制人姓名，置于4°C冰箱中保存备用。3.MS铁盐母液配制把FeSO4?7H2O和Na2?EDTA?2H2O分另U置于200ml蒸憾7K中，加热并不断搅拌使之溶解。保持加热，把FeSO4溶液慢慢倒入Na2?EDTA溶液中并不断搅拌，接近沸腾时停止加热，待溶液冷却后把pH值调到5.5,加蒸憾水到最终容积500ml,置于棕色细口瓶中，用力振荡1〜2min,贴上标签
6、，注明母液名称、放大倍数、配制日期、配制人姓名。在室温下避光保存一段时间令其充分反应后，PJ置十4°C冰箱中保存备用。3.MS有机化合物母液的配制按配方表中用量依次称取：肌醇，维生素B1,烟酸，甘氨酸，维生素B6,用蒸憾水依次溶解并定容后，转入500ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、配制日期、配制人姓名，置于4°C冰箱中保存备用。5•植物牛长物质母液的配制2,4・D母液：准确称量10mg2,4・D,先用少量lmol/LNaOH溶液元全溶解后，加蒸谓水定容至100ml,即配成浓度为0.1mg/m1的2,4・D母液。转入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、浓度、配制FI期、配制人
7、姓名，置于4°C冰箱中保存备用。NAA母液：配制浓度为0.1mg/mloNAA仍属于生长素类激素，配制方法与2,4-D相似。五、实验报告1•撰写实验报告。（包括实验名称、目的、原理、实验用品、实验操作内容，实验结果，数据记录与处理、分析和讨论）2.思考题（必做）根据下列表中各母液或药品的浓度，试计算配制不同体积的（MS+1mg/L2,4-D+0.5mg/L6・BA+糖+琼月旨）培养基所需吸取的母液或所称取的药品量，并将结果填入表中（见下页），（
