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时间:2019-11-28
《木瓜中多糖的提取、分离与鉴定【药学毕业论文,绝对】》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、药学论文•木瓜中多糖的提取・分离与鉴定摘要:采取索氏抽提法、水提醇沉法、乙醇回流提取法、复合提取法从木瓜中提取多糖,经过分离纯化后,进行IR鉴定。为木瓜多糖的工业化生产提供了一定的理论依据。关键词:木瓜;多糖;提取;分离;鉴定0前言多糖(polysacharidcs,PS),又称多聚糖,是一种具有广泛生物活性的大分子。从各种中草药和其他植物中都可以提取分离出多糖,我国近年来对植物多糖,特别是具有中国特色的中草药多糖的药物活性已有广泛报道。木瓜原名番木瓜,始载丁《名医别录》,属蔷薇科木瓜属植物,是我国特有果木之一,主要生长在亚热带温暖湿润的山区地带,是一种药食同源的植物,性温味酸。现代医学证明:
2、木瓜果实中含有丰富的糖分、番木瓜碱、木瓜蛋白嗨,并含有17种以上的氨基酸及多种微量元素。日前已有大量木瓜产品上市,如木瓜饮料、木瓜醋、木瓜奶、木瓜酒、木瓜干片、木瓜脯等,深受人们的喜爱。湖北建始县盛产木瓜,但是创收的途径主要是通过销售鲜木瓜或干木瓜,其他相关产品的开发并不多见。从木瓜屮提取和分离鉴定具有保健和药理活性的功能性成分,对于捉高木瓜的经济价値,解决目前农民木瓜丰产不丰收、大量木瓜急待加工开发的问题具有积极的意义。本实验对木瓜中多糖进行硏究,拟对其提取工艺进行优化,并对粗多糖进行分离纯化鉴定组成和结构进行初步表征,为进一步提高木瓜的附加値提供试验依据。1材料与方法1.1材料(1)原料:
3、湖北省建始县干木瓜片,粉碎机粉碎(2)仪器:TDL-5-A台式离心机,UV-7504紫外■可见分光光度计,SHZ・HI型循环水真空泵,紫外扫描仪,付立叶变换红外光谱仪,Prostar高效液相色谱仪等。(3)试剂:石油醍(沸程60・90°C),丙酮,乙醇(95%),戊醇,三氯甲烷,氯化钠,磷酸二氢钠,磷酸氢二钠,硫酸,盐酸,苯酚,葡萄糖,乙瞇,三氟三氯乙烷,三氯醋酸,碘液,硫酸铜,酒右酸钾钠,D・半乳糖沖臭化钾,碳酸领。1-2方法(1)多糖的测定:用苯酚■硫酸法对多糖测定。(2)多糖的提取:①不同提取多糖方法的比较。分别用索氏抽提法,水提醇沉法,乙醇冋流提取法,复合提取法提取木瓜屮的多糖,并比较
4、多糖得率,选择较好的水捉醇沉法进行优化处理。%1水提醇沉法提取多糖工艺的优化单因素试验a温度对提取率的影响:加水量为30ml,水提时间为30分钟,分别在75°C、80°C、85°C、90°C、95°C的水浴条件下,捉取多糖,用苯酚•硫酸法测定其含量,b加水量对提取率的影响:水浴温度为90°C,水提时问为30分钟的条件下,改变加水量,提取多糖,并采用苯酚■硫酸法进行测定,c水提时间对提取率的影响:水浴温度为90°C,加水量为40ml的条件下,不同的水提吋间对多糖得率的影响,正交试验根据单因素实验的结果,选取合适的水平,对其进行优化处理。(1)多糖的分离、纯化。%1蛋白质的去除:分别用Sevage
5、法,三氟三氯乙烷法,三氯醋酸法去除样品中的蛋白质。%1低聚糖等小分子杂质的去除:通过逆向流水透析除去低聚糖等小分子杂质。%1多糖的柱层析纯化:采用DEAE-52纤维素离子交换柱柱层析方法进行。依次用0.5mol/L的NaOH、HC1和蒸馆水处理塡柱材料至中性,反复处理三次后用蒸镉水洗至中性,抽气装柱。用pH二7.6PBS溶液平衡48小时。称取粗多糖1・0g,溶于少量蒸锚水中,离心除去不溶物,上清液过柱。用0.1-2.0mol/L的NaCl・PBS溶液梯度洗脫,控制流速为lml/min,采用部分收集器按5ml/tub收集。以苯酚•硫酸法测吸光値(490nm)作洗脫曲线,根据吸光値将I司一组分合并
6、。(4)多糖的鉴定。%1淀粉的碘反应:将纯化后的得到的多糖配制成5%的溶液,滴加碘液().2ml,水浴加热,观察颜色是否有变化,同时做淀粉的对比试验。%1溶解性:称取纯化后的多糖0.5g,加入3ml的水,常温下搅拌,观察其溶解性。%1还原糖的测定:取0.1mg/ml的多糖溶液50ml于试管中,在80°C的恒温水浴锅中保温30分钟,吸取6ml,加入4m1的斐林试剂(等体积的斐林试剂A液和斐林试剂B液混合),于590nm处比色。%1蛋白质的测定:将纯化得到的多糖在190-400nm处进行UV扫描,观察在250-280nm处没有吸收峰,判断是否有核酸和蛋白质的存在°%1IR鉴定多糖中糖昔键的类型:将
7、多糖与漠化钾烘干后,称取多糖2mg与lOOmg的浪化钾硏賂,压片,置于红外图谱分析仪中作红外分析。%1HPLC鉴定多糖中单糖的组成:用高效液相色谱法对木瓜多糖的单糖组成进行定性鉴定。样品的处理:称取纯化后的多糖lO.Omg,加lmol/L的硫酸2ml,充N2后于100C水浴加热5h,用BaC03中和,膜过滤后作为待测样品。标准液的配制:称取葡萄糖、半乳糖25mg,分别溶于5m1的蒸锚水中,配成5m
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