木瓜中多糖的提取、分离与鉴定【药学毕业论文，绝对】

《木瓜中多糖的提取、分离与鉴定【药学毕业论文，绝对】》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、药学论文•木瓜中多糖的提取・分离与鉴定摘要：采取索氏抽提法、水提醇沉法、乙醇回流提取法、复合提取法从木瓜中提取多糖，经过分离纯化后，进行IR鉴定。为木瓜多糖的工业化生产提供了一定的理论依据。关键词：木瓜；多糖；提取；分离；鉴定0前言多糖（polysacharidcs，PS），又称多聚糖，是一种具有广泛生物活性的大分子。从各种中草药和其他植物中都可以提取分离出多糖，我国近年来对植物多糖，特别是具有中国特色的中草药多糖的药物活性已有广泛报道。木瓜原名番木瓜，始载丁《名医别录》，属蔷薇科木瓜属植物，是我国特有果木之一，主要生长在亚热带温暖湿润的山区地带，是一种药食同源的植物，性温味酸。现代医学证明：

2、木瓜果实中含有丰富的糖分、番木瓜碱、木瓜蛋白嗨，并含有17种以上的氨基酸及多种微量元素。日前已有大量木瓜产品上市，如木瓜饮料、木瓜醋、木瓜奶、木瓜酒、木瓜干片、木瓜脯等，深受人们的喜爱。湖北建始县盛产木瓜，但是创收的途径主要是通过销售鲜木瓜或干木瓜，其他相关产品的开发并不多见。从木瓜屮提取和分离鉴定具有保健和药理活性的功能性成分，对于捉高木瓜的经济价値，解决目前农民木瓜丰产不丰收、大量木瓜急待加工开发的问题具有积极的意义。本实验对木瓜中多糖进行硏究，拟对其提取工艺进行优化，并对粗多糖进行分离纯化鉴定组成和结构进行初步表征，为进一步提高木瓜的附加値提供试验依据。1材料与方法1.1材料(1)原料：

3、湖北省建始县干木瓜片,粉碎机粉碎(2)仪器：TDL-5-A台式离心机，UV-7504紫外■可见分光光度计，SHZ・HI型循环水真空泵，紫外扫描仪，付立叶变换红外光谱仪，Prostar高效液相色谱仪等。(3)试剂：石油醍(沸程60・90°C)，丙酮，乙醇(95%)，戊醇，三氯甲烷，氯化钠，磷酸二氢钠，磷酸氢二钠，硫酸，盐酸，苯酚，葡萄糖，乙瞇，三氟三氯乙烷，三氯醋酸，碘液，硫酸铜，酒右酸钾钠，D・半乳糖沖臭化钾，碳酸领。1-2方法(1)多糖的测定：用苯酚■硫酸法对多糖测定。(2)多糖的提取：①不同提取多糖方法的比较。分别用索氏抽提法，水提醇沉法，乙醇冋流提取法，复合提取法提取木瓜屮的多糖，并比较

4、多糖得率，选择较好的水捉醇沉法进行优化处理。%1水提醇沉法提取多糖工艺的优化单因素试验a温度对提取率的影响：加水量为30ml，水提时间为30分钟，分别在75°C、80°C、85°C、90°C、95°C的水浴条件下，捉取多糖，用苯酚•硫酸法测定其含量，b加水量对提取率的影响：水浴温度为90°C，水提时问为30分钟的条件下，改变加水量，提取多糖，并采用苯酚■硫酸法进行测定，c水提时间对提取率的影响：水浴温度为90°C，加水量为40ml的条件下，不同的水提吋间对多糖得率的影响，正交试验根据单因素实验的结果，选取合适的水平，对其进行优化处理。(1)多糖的分离、纯化。%1蛋白质的去除：分别用Sevage

5、法，三氟三氯乙烷法，三氯醋酸法去除样品中的蛋白质。%1低聚糖等小分子杂质的去除：通过逆向流水透析除去低聚糖等小分子杂质。%1多糖的柱层析纯化：采用DEAE-52纤维素离子交换柱柱层析方法进行。依次用0.5mol/L的NaOH、HC1和蒸馆水处理塡柱材料至中性，反复处理三次后用蒸镉水洗至中性，抽气装柱。用pH二7.6PBS溶液平衡48小时。称取粗多糖1・0g，溶于少量蒸锚水中，离心除去不溶物，上清液过柱。用0.1-2.0mol/L的NaCl・PBS溶液梯度洗脫，控制流速为lml/min，采用部分收集器按5ml/tub收集。以苯酚•硫酸法测吸光値(490nm)作洗脫曲线，根据吸光値将I司一组分合并

6、。(4)多糖的鉴定。%1淀粉的碘反应:将纯化后的得到的多糖配制成5%的溶液，滴加碘液().2ml，水浴加热，观察颜色是否有变化，同时做淀粉的对比试验。%1溶解性：称取纯化后的多糖0.5g，加入3ml的水，常温下搅拌，观察其溶解性。%1还原糖的测定：取0.1mg/ml的多糖溶液50ml于试管中，在80°C的恒温水浴锅中保温30分钟，吸取6ml，加入4m1的斐林试剂(等体积的斐林试剂A液和斐林试剂B液混合)，于590nm处比色。%1蛋白质的测定：将纯化得到的多糖在190-400nm处进行UV扫描，观察在250-280nm处没有吸收峰，判断是否有核酸和蛋白质的存在°%1IR鉴定多糖中糖昔键的类型：将

7、多糖与漠化钾烘干后，称取多糖2mg与lOOmg的浪化钾硏賂，压片,置于红外图谱分析仪中作红外分析。%1HPLC鉴定多糖中单糖的组成：用高效液相色谱法对木瓜多糖的单糖组成进行定性鉴定。样品的处理：称取纯化后的多糖lO.Omg，加lmol/L的硫酸2ml，充N2后于100C水浴加热5h，用BaC03中和，膜过滤后作为待测样品。标准液的配制：称取葡萄糖、半乳糖25mg，分别溶于5m1的蒸锚水中，配成5m