残渣中甘草多糖的提取分离

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1、甘草酸的提取和测定一．实验目的：1掌握干草的提取原理2熟悉皂甙的性质和测定方法二实验原理甘草酸是由甘草中提取。甘草，又名美草、蜜甘、甜根子，多生长在我国西北、华北、东北地区，为多年生草本植物。甘草酸作为其主要成分，随产地不同含量亦不同，一般在(4～14)％之内。甘草酸是甘草甜味的有效成分，又名甘草甜素、甘草皂甙。分子式42H62O16，相对分子质量822.92。甘草酸为白色或淡黄色结晶型粉末，熔点220℃，有特殊甜味，其甜度约为蔗糖的250倍，溶于热水和热的稀乙醇，不溶于无水乙醇和乙醚。甘草酸遇酸则沉淀，常利用此性质进行提取和精制。为了使用方便，一般都把甘草酸制成水

2、溶性的盐类，如甘草酸钠、甘草酸二钠、甘草酸三钠、甘草酸铵等。方法：甘草酸在原料中以钾盐和钙盐的形式存在，其盐易溶于水，因此可用极性溶剂溶解，提取后滤液再加硫酸，因难溶于酸性溶液而析出游离的甘草酸。三．实验步骤甘草酸的制备（1）粉碎：将干净干燥的甘草放入粉碎机中粉碎，过10目筛选，制得甘草粉。（2）提取：称取一定质量的甘草粉放入反应器中，加入其5倍质量的水，在搅拌下于85℃以上加热回流2．5h，过滤、滤渣再加3倍质量的水重复提取一次，合并泸液。（3）浓缩：将甘草酸提取液用薄膜蒸发器进行真空浓缩，当滤液体积减少4／5时，趁热过滤。（4）分离：在已经冷却的浓缩滤液中，加入

3、其1／2容量的95%的乙醇，然后静止过夜，经过滤除去植物蛋白、多糖等沉淀物。（5）沉淀：在经上述处理的甘草酸浓缩液中，用浓硫酸调其PH值，使甘草酸沉淀析出，然后进行离心分离，得粗甘草酸。（6）重结晶：用(60～70)℃的稀乙醇进行重结晶，减压过滤后得甘草酸湿品。（7）干燥：将湿甘草酸放入真空干燥箱内，调节真空度，在(70～80)℃温度下加热(40～60)min，即得干甘草酸。（8）成品：将干燥的甘草酸粉碎，过筛，即得甘草酸成品。甘草酸的定性和定量测定1甘草酸的定性鉴别取样品4mg，置白磁板上，加4%硫酸7滴，渐渐变成橙黄色至橙红色。2甘草酸纯度的测定取样品6g，精确

4、称定，加蒸馏水50mL溶解后，移置100mL容量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀，静置10h。吸取上清液250mL置小烧杯中，加氨试液3滴。然后加热至稠膏状，加30mL蒸馏水溶解，慢慢加入3%盐酸溶液5mL，在冰水中冷却30min，过滤，沉淀物用5mL冰水洗3次。弃去洗液及滤液，将沉淀物放在表面皿中使水分自然蒸发，然后加入10mL65℃的乙醇，使沉淀物溶解，过滤，将乙醇溶液放入干燥恒重的烧杯中加热蒸干，精确称定。则甘草酸纯度(X)的计算采用下式：A=13.17C—0.017提取率=nCV/m×100％n提取液稀释倍数c提取液中甘草酸的浓度mg/mlv提取液体积mlm甘草

5、的质量mgA吸光度甘草酸产品的质量指标经测试甘草酸的质量指标如下(质量分数)：甘草酸含量(以C42H62O16计)：≥65％；水分：≤12％；灰分：≤11％；重金属：≤25×10－6；熔点：218－220℃。残渣中甘草多糖的提取分离一、实验目的:掌握多糖类物质的提取方法。二、实验原理：甘草多糖为易溶于水的白色粉末，熔点很高，不溶于酒精等有机溶剂，故可以用水提醇沉法得到甘草多糖。醇沉法的基本原理是：利用药材等植物中的大多数成分如生物碱盐、甙类、有机酸类、氨基酸、多糖等易溶于水和醇中的特性，用水提出，并将其提取液浓缩，加入适当的乙醇或水反复数次沉降，除去其不溶物质，最后

6、得到澄明液体。苯酚法测定；糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10－100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵敏度高，实验时基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色稳定160min以上。三、实验材料和仪器：仪器：分光光度计、电炉、铝锅、20mL刻度试管、刻度吸管、记号笔、吸水纸适量。试剂：提取甘草酸后的废渣，硫酸，苯酚，95%乙醇，葡萄糖标准品。药品配置方法（1）90％苯酚溶液：称取90g苯酚（AR），加蒸

7、馏水10mL溶解，在室温下可保存数月。（2）9％苯酚溶液：取3mL90％苯酚溶液，加蒸馏水至30mL，现配现用。（3）浓硫酸（比重1.84）。（4）1％蔗糖标准液：将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重，精确称取1.000g。加少量水溶解，移入100mL容量瓶中，加入0.5mL浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度。（5）100ug/L蔗糖标准液：精确吸取1％蔗糖标准液1mL加入100mL容量瓶中，加水定容。四、实验步骤：1、取一定量的甘草药渣，将中药水提液浓缩至1︰1～1︰2（ml︰g），药液放冷后，边搅拌边缓慢加入乙醇使达规定含醇量，密闭冷藏24～48h，滤过，滤液回收乙醇，得