枸杞多糖的提取与鉴定

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1、枸杞多糖的提取与鉴定1242818杨立君实验原理强酸可以使糖类脱水生成糠醛。生成的糠醛或轻甲基糠醛与蔥酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。颜色的深浅可以作为定量的标准。这一方法具有很高的灵敏度，糖含量在30Pg左右就能进行测定，所以可以作为微量测糖之用。一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。⑴实验试剂1•标准葡萄糖试剂：将葡萄糖105°C烘干至恒重(2h),准确称取50mg,无离子水定容至500mL,终浓度为0.1mg/mL.2.蔥酮■浓硫酸试剂：称取0.1997g蔥酮，溶于lOOmL浓硫酸，现用现配。3

2、•葡萄糖，阿拉伯糖，甘露糖⑵，[3]4.硫代硫酸钠溶液，活性炭，正丁醇，无水乙醇，丙酮。三氯甲烷，甲苯胺乙醇溶液实验器材分光光度计，超速离心机，电炉，烧杯，试管，干燥器，滤纸，层析缸以及英他相关玻璃仪器实验流程(-)提取枸杞干果粉碎，氯仿・甲醇(2:1)回流脱脂8-10h近无色，挥干溶剂以后将脱脂后的枸杞样品放入烧杯中，分3次加15、12、10倍量的蒸谓水于90°C水浴提取，每次2h；收集3次的滤液减压浓缩至约200mL,转移到大烧杯中，加4倍量的95%乙醇，沉淀12h后抽滤，并依次用无水乙醇、丙酮、无水乙瞇洗涤

3、，干燥后便得到枸杞多糖的粗制品。[4]（二）纯化多糖粗品加水溶解，4000r/min离心10min后取上清液，力口30%双氧水适量，40°C保温4〜6h后，加三氯甲烷■正丁醇（4：1,Sevag法）溶液沉淀蛋白，取上清液；此步骤反复多次，直到无白色絮状沉淀出现。将除去蛋白的多糖溶液浓缩后，转移到分子排阻为8000-10000Da的透析袋中，流水透析24h后，蒸他水透析过夜，溶液颜色变淡，浓缩后真空干燥得枸杞多糖精制品。[4]（三）理化性质分析将枸杞多糖精品分别加入水、乙醇、丙酮、乙酸乙酯和正丁醇中，观察其溶解性。

4、另在浓硫酸存在下观察枸杞多糖与ci■蔡酚的作用，于界面处观察颜色变化。（四）蔥酮比色法测定含量1.制备标准曲线：取六只试管，如下表进行操作：2.样品含量测定吸取lml多糖溶液置试管中，浸于冰浴中冷却，再加入4ml蔥酮试剂，沸水浴中煮沸lOmin,取出后自來水冷却，620nm比色，其他条件与做标准曲线相同。测得吸光度值由标准曲线查处出样品液的糖含量。（如果样甜管的吸光度值超出标准曲线范围，需将样詁进行适当的稀释，再取lmL进行鉴定）。3,计算根据所测的吸光度平均值，根据标准曲线，求得糖含量（微克），记为C枸杞多糖枸

5、杞多糖含量（ug/g）=（C枸杞多糖?V枸杞多糖?n）4-m式中C枸杞多糖表示lmL样品测定液的多糖含量（ug）卩枸杞多糖表示多糖提取液的体积（mL）;n表示测定液的稀释倍数；m表示枸杞的质量。（五）枸杞多糖及单糖鉴定纸层析1.以止丙醇■浓氨水■水为展开剂，分别将枸杞多糖粗品和精品溶于水中，点样于层析滤纸上，展层后吹干，以甲苯胺乙醇溶液染色，乙醇漂洗。2.将层析滤纸剪成纸条，将多糖样品水解液点样，近旁点已知组分的标准混合液。滤纸条悬挂于层析缸中层析，纸条在显色剂中浸泡一下，悬于空气中，用NaOH■乙醇液喷雾于滤纸

6、上至完全润浸并显出色斑，干燥,浸入硫代硫酸钠溶液中定影。与已知组分的标准单糖混合物所显的色斑对比，就可鉴定多糖样品中单糖的成分。［1］参考文献⑴侯新东，盛桂莲，葛台明，李继红•生物化学实验指导书［M］・武汉:中国地质大学出版社有限责任公司,2011年12月第一版［2］苟春林，苟金萍，张艳，王晓菁，姜瑞•枸杞多糖的提取分离及其组成研究［几宁夏农林科技,2012,53（05）：89-90,92⑶武金霞•牛物化学实验教程［M］,北京：科学出版社，2012年8月第一⑷刘军海，任惠兰，李风风，李广录•响应面分析法优化枸杞多

7、糖提取工艺条件［几时珍国医国药2008年第19卷第4期DataAnalysis由图可知，反应的级数是一级.半衰t=ln2/k=121.06min.