木聚糖酶活力特性研究

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1、木聚糖酶活力特性研究郑翔鹏（福建省燕京惠泉啤酒股份有限公司）概况木聚糖酶分子只含一个亚棊，分子量在8〜30kD间的为碱性蛋白，分子量在30〜145kD间的为酸性蛋白。PI值为3〜10.5,稳定pH值为3〜10,反应最适pH值在4〜7Z间，最适温度为40〜60°Co离子通过改变酶的构彖影响木聚糖酶的稳定性，一般情况下,Ag+（离子浓度1mmol-L-1,抑制酶活达100%）、Hg2+（离子浓度1mmol•L-1,抑制酶活达7013%）、Cu2+（离子浓度2.00mg-ml-1，抑制酶活达25.42%）等离子抑制木聚糖酶的活性,Mg2+（离子浓度2.00mg•ml-1,提高酶活达6

2、%）、Mn2+（离子浓度1nimol•L-1,提高酶活达24%）等离子则能提高木聚糖酶的活性。Ag+、Hg2+、Cu2+等离子主要通过改变酶分子屮2SH基团的还原态或直接攻击酶分了屮的某些氨基酸残某，改变酶的构象来抑制木聚糖酶的活性，Mg2+、Zn2+等则通过影响酶与底物的结合及解离状态，提高酶的活性，其具体机制还有待进一步研究。木聚糖酶的分子结构由功能结构域和连接区构成。其屮，功能结构域由催化结构域和纤维索结合结构域构成，纤维索结合结构域可改变酶对可溶或不溶底物的活力。根据结构域的相似性，木聚糖嗨可通过结构域的改组和随后结构域的修饰而进，许多木聚糖酶具有纤维素酶的活性。木聚糖

3、嗨与木聚糖的结合利川离子间的静电作川。木聚糖含有的4-0-T基衙糖醛酸帯负电，木聚糖酶在pH低于PT吋帯正电荷，易于结合，而在pH值高于円吋，则不易结合。其反应为典型的酸碱亲核水解反应。木聚糖酶特性分析在对木聚糖酶的特性分析中，着重分析酶活力与温度、PH值、钙离子对酶活力的影响。1.1木聚糖酶活力分析对于木聚糖酶活力的分析，国标屮没有相应的推荐方法。目前，主要采川分光比色测定反应液颜色的强度来定量分析酶的活力。木聚糖酶活力单位是指在50°C、pH值为5.3的条件下，毎分钟从浓度为lOmg/ml的木聚糖溶液屮降解释放lpmol还原糖所需要的酶量为一个酶活力单位U。1.1.1分析原

4、理木聚糖酶能将木聚糖降解成寡糖和单糖。具有还原性末端的寡糖和有还原基团的单糖在沸水浴条件下可以・DNS试剂发牛显色反应。反应液颜色的强度与酶解产牛的还原糖量成正比，而还原糖的牛成量又与反应液中木聚糖酶的活力成正比。1.1.2主要试剂（略）1.1.3标准曲线的绘制吸取水1.0ml,加入DNS试剂3.0ml,沸水浴加热5mino用自来水冷却至室温,制成标准空白样。分别吸取木糖溶液1.00、2.00、3.00、4.00、5.00ml,分别用水定容至100ml,配制成浓度为0.10〜0.50mg/ml木糖标准溶液。分别吸取上述浓度系列的木糖标准溶液各1.00ml（做二个平行），分别加入

5、到刻度试管中，再分别加入3mlDNS试剂。电磁振荡3s,沸水浴加热5min0然后用口来水冷却到室温，以标准空口样为对照调零，在540nm处测定吸光度0D值。以木糖浓度为Y轴、吸光度0D值为X轴，绘制标准曲线。每次新配制DNS试剂均需要重新绘制标准曲线。1.1.4样品制备木聚糖酶活力特性研究郑翔鹏（福建省燕京惠泉啤酒股份有限公司）概况木聚糖酶分子只含一个亚棊，分子量在8〜30kD间的为碱性蛋白，分子量在30〜145kD间的为酸性蛋白。PI值为3〜10.5,稳定pH值为3〜10,反应最适pH值在4〜7Z间，最适温度为40〜60°Co离子通过改变酶的构彖影响木聚糖酶的稳定性，一般情况

6、下,Ag+（离子浓度1mmol-L-1,抑制酶活达100%）、Hg2+（离子浓度1mmol•L-1,抑制酶活达7013%）、Cu2+（离子浓度2.00mg-ml-1，抑制酶活达25.42%）等离子抑制木聚糖酶的活性,Mg2+（离子浓度2.00mg•ml-1,提高酶活达6%）、Mn2+（离子浓度1nimol•L-1,提高酶活达24%）等离子则能提高木聚糖酶的活性。Ag+、Hg2+、Cu2+等离子主要通过改变酶分子屮2SH基团的还原态或直接攻击酶分了屮的某些氨基酸残某，改变酶的构象来抑制木聚糖酶的活性，Mg2+、Zn2+等则通过影响酶与底物的结合及解离状态，提高酶的活性，其具体机制

7、还有待进一步研究。木聚糖酶的分子结构由功能结构域和连接区构成。其屮，功能结构域由催化结构域和纤维索结合结构域构成，纤维索结合结构域可改变酶对可溶或不溶底物的活力。根据结构域的相似性，木聚糖嗨可通过结构域的改组和随后结构域的修饰而进，许多木聚糖酶具有纤维素酶的活性。木聚糖嗨与木聚糖的结合利川离子间的静电作川。木聚糖含有的4-0-T基衙糖醛酸帯负电，木聚糖酶在pH低于PT吋帯正电荷，易于结合，而在pH值高于円吋，则不易结合。其反应为典型的酸碱亲核水解反应。木聚糖酶特性分析在对木聚糖酶的特性分析中