重组里氏木霉产高活力外切-β-葡聚糖酶的研究

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1、⑧论文作者签名：塾左指导教师签名：论文评阅人l：评阅人2：评阅人3：评阅人4：评阅人5：答辩委员会主席：委员1：委员2：委员3：委员4：委员5：隆名证闷一隐名证闽堕名证凶至苤红邀堑业匿堑烂星缝邀一．勐熟垂堑婆叁茎．．夔熊型煎煎堑．迅查茎～一基鍪毋塑照逝尘亟塞望浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及耿得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得逝’江盘堂或其他教育机构的学位或证书而

2、使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：孔哿签字日期：2。蚪年弓月JQ日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解迸姿盘堂有权保留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权迸姿态鲎可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：孔芹导师签名：傀％卅心签字日期：20J4年

3、多月J0闩签字日期：如洱年弓月ID日浙江大学硕士学位论文致谢“你来浙大做什么?你毕业后要成为怎么样的人”，竺可桢校长的这句话如一盏指明灯，指引我顺利完成研究生学业。两年多的学习生活，本人得到很多人的帮助，在此致以真诚的谢意。首先，感谢夏黎明老师的悉心指导和殷切关怀。夏老师为人亲切和善，在科研与生活中给予我无限鼓励；夏老师做事一丝不苟，对我们严格要求，是一位可敬可佩的导师。正是夏老师的鼓励与指导，才让我们的研究生生活如此充实。其次，感谢顾斌涛、蒋守坤、赵海峰、赵杰、蒋兴、方圆、陶亮亮、章旭、历雪琪

4、、白冬梅等同门的兄弟姐妹对我科研和生活中的指导与帮助。正是他们的热心，让我感觉实验室就像一个大家庭，团结互助，助我顺利完成科研任务。再次，感谢刘浩婧、余晶梅、李亭亭、王明霞等朋友于我生活中的关心和照顾。是他们在我需要帮助时给予支持与鼓励，让我校园生活充满了欢笑。最后，郑重地感谢我的亲人、导师、同门兄弟姐妹和朋友们，是你们的无私奉献与鼓励支持让我顺利完成研究生学业!我的人生即将步入新的阶段。我会更加努力，在职场生涯中，绘出人生新的篇章!孔芹2014年3月于浙大求是园浙江大学硕士学位论文摘要外切一B

5、一葡聚糖酶(C1)是纤维素酶的重要组分之一，提高该组分的活力是增强纤维素酶协同降解性能、降低纤维素水解成本的关键技术之一。本文采用微晶纤维素琼脂平板法和滤纸崩解法分别对200个里氏木霉重组转化子进行筛选，得到了六个优良转化子，其滤纸崩解速率和在微晶纤维素琼脂平板上的生长速率都较大。进一步在摇瓶条件下进行复筛试验，获得了外切一p一葡聚糖酶高产转化子ZreeseiZU一101，液体培养48h，其Cl酶活力可达18．24U·mL～，是出发菌株的2．16倍：其纤维素酶的总活力(滤纸酶活力FPA)也提高了

6、61．9％。对TreeseiZU．101的产酶性能进行了深入研究，与出发菌株相比，重组转化子的纤维素酶体系中，内切一B一葡聚糖酶(CMC)和纤维二糖酶的活力变化不大，但外切一B一葡聚糖酶活力明显提高。摇瓶培养120h，Cl酶活力可高达34．66U·mL～，是出发菌株的1．26倍。由于外切一D一葡聚糖酶得到了定向增强，滤纸酶活力也得到了明显提高，发酵120h达7．35IU·mL～，比出发菌株提高了40％。对重组转化子ZreeseiZU．101的分批补料发酵工艺进行了研究，结果表明：发酵48h后开始

7、补加料液，其乳糖浓度为15％，C／N为7，每隔48h补加2％(V／V)，发酵168hCl酶活力可达55．689U·mL～，是分批发酵工艺(batchprocess)的2．11倍。以NaOH(2％)预处理后的玉米秸秆为底物，对T．reeseiZU一101所产纤维素酶的降解性能进行了深入研究，在底物浓度为10％、每克底物的纤维素酶用量为20FPIU(滤纸酶活力国际单位)的条件下，T．reeseiZU．101纤维素酶的酶解得率比出发菌株提高了43％：在TreeseiZU一101纤维素酶系中，C．酶活力

8、与CMC活力和滤纸酶活力的比例分别为l：23和4：1，而出发菌株纤维素酶系中，cl酶活力与CMC活力和滤纸酶活力的比例分别为1：24和3：l，纤维素酶复合体系中C1酶活力比例的提高，有利于结晶性较高的秸秆纤维素的协同降解。进一步研究发现：1)增大反应体系中纤维二糖酶活力的比例，可以显著提高酶解得率。在上述相同酶解条件下，当纤维二糖酶用量为300IU·g。1底物，纤维二糖酶活力(IU)与滤纸酶活力(IU)的比例为15：1时，酶解得率可高达95％；2)添加木聚糖酶可以促进秸秆原料的酶解效率，在底物浓