中性内切-β-葡聚糖酶基因在里氏木霉中的重组与表达.pdf

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1、第27卷第1期高校化学工程学报No．1、b1．272013年2月JournalofChemicalEngineeringofChineseUniversitiesFeb2Ol3文章编号：1003—9015(2013)01—0108-05网络出版地址：http：／／wwwcnki．net／kcms／detail／33．1141．TQ．20121229．I718．004-htmI中性内切一p-葡聚糖酶基因在里氏木霉中的重组与表达顾斌涛，江守坤，夏黎明(浙江大学化学工程与生物工程学系，浙江杭州31002

2、7)摘要：中性内切一p一葡聚糖酶在棉织物生物整理方面具有重要的应用价值，研究首先从特异腐质霉(Humicolains0le菌株中克隆到一个中性内切-p一葡聚糖酶基因，将该基因置于里氏木霉(TrichodermareeseO纤维二糖水解酶I强启动子Pcbhl(及其信号肽)和终止子Tcbhl之间，并以pCAMBIA1300为载体骨架构建重组质粒pCB-PHT。采用根瘤农杆菌介导转化技术将重组质粒pCB-PHT导入里氏木霉的分生孢子中，进一步筛选得到八个重组里氏木霉转化子。摇瓶发酵培养72h时，发酵液的

3、中性内切．p·葡聚糖酶活力最高可达到98．8IU．mL左右，是出发菌株的5．1倍。研究成功地实现了外源中性内切．p．葡聚糖酶在丝状真菌里氏木霉中的重组与胞外表达，有关研究结果将在牛仔布水洗工业中发挥出重要作用。关键词：中性内切．B-葡聚糖酶；里氏木霉；基因重组；表达；牛仔布；生物整理中图分类号：Q556．9文献标识码：ADOh10．3969／j．issn．1003．9015．2013．01．0l8RecombinationandExpressionofNeutralEndo——GlucanaseG

4、enefromHumico~InsolensinTrichodermaReeseiGUBin-tao，JIANGShou-kun，XIALi·ming(DepartmentofChemicalEngineeringandBioengineering，ZhejiangUniversity,Hangzhou310027，China)Abstract：Neutralendo-p-glucanaseiswidelyusedforthebiofinishingapplicationinthetextilei

5、ndustry．Inordertoimprovetheneutralendo-p—glucanaseactivityofTrichodermreesei，theendo—p-glucanasegenefromHumicolainsolenswasclonedbvmereversetranscriptionPCRmethod，andwasinsertedbetweenreeseistrongpromoterPcbhl(inc1udingsecretingsignalpeptidesequence)a

6、ndterminator，furtherligatedtopCAMBIA1300vectortoconstructplasmidpCB-PHT．TheplasmidpCB-PHTWastransformedintoreeseiZU．02viaanoptimizedAgrobacteriumtumefaciensmediatedtransformation。andtheextracellularendo一6一glucanaseWasexpressedunderthecontrolofreeseist

7、rongpromoterPcbh1．Eightreeseitransformantswithsuccessfulintegrationoftheendo--glucanasegeneexpressioncassettewereobtained．After72hshaking。flaskfermentation，theendo．D—glucanaseactivityofthereeseitransformantinthefermentationsolutionreaches98．8IU．mL_。．w

8、hichiS5．1．foldashighasthatofthehoststrain．Thisresultshowsthattheendo．13．glucanasegeneiSsuccessfullytransformedandexpressedinreesei．TheTreeseitransformantsareparticularlysuitableforusesindenimwashingindustry．Keywords：neutralendo一13-glucanase；Tr