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《里氏木霉木聚糖酶基因xyn2的克隆与表达》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第29卷第5期南京工业大学学报Vol.29No.52007年9月JOURNALOFNANJINGUNIVERSITYOFTECHNOLOGYSep.2007里氏木霉木聚糖酶基因XYN2的克隆与表达1211王向明,欧阳嘉,严明,许琳(1.南京工业大学制药与生命科学学院,江苏南京210009;2.南京林业大学化学工程学院,江苏南京210037)摘要:采用RT2PCR(reverse2transcriptionPCRassay)技术,从里氏木霉QM9414mRNA中扩增出木聚糖酶基因XYN2,并与质粒pYX212相连,构建了组成型表达载体pYX212/XYN2.将此重组质粒转化
2、入酿酒酵母菌株YPH499进行表达.分析了不同碳源、温度、摇瓶转速、初始pH对其产酶的影响.实验结果表明,最佳碳源是葡萄糖,最佳转速是260r/min,最佳初始pH是610.优化重组菌的发酵条件后得到的最大酶活为0155IU/mL.关键词:RT2PCR;TrichodermareeseiXYN2基因;酿酒酵母;克隆;表达3中图分类号:Q786文献标识码:A文章编号:1671-7627(2007)05-0082-06CloningandexpressionoftheT.reeseixylanasegeneXYN21211WANGXiang2ming,OUYANGJia,YA
3、NMing,XULin(1.CollegeofLifeScienceandPharmaceuticalEngineering,NanjingUniversityofTechnology,Nanjing210009,China;2.CollegeofChemicalEngineering,NanjingForestryUniversity,Nanjing210037,China)Abstract:XYN2genefragmentsweresuccessfullyamplifiedfromTrichodermareeseistrainQM9414mRNAbyRT2PCR(re
4、verse2transcriptionPCRassay)technologyandwereligatedtopYX212vectorastheexpressionvectorpYX212/XYN2.SaccharomycescerevisiaYPH499competentcellsweretransformedwiththerecombinantplasmidandbeganexpressing.Theeffectsofdifferentcarbonsources,temperature,rotaryspeedandinitialpHonxylanaseproductio
5、noftherecombinantwereinvrstigated.Theresultindicatsthattheoptimalcarbonsourceisglucose,theoptimaltemperatureis30℃,theoptimalrotaryspeedis260r/min,andtheoptimalinitialpHis610.Themaxi2mumxylanaseactivityoftherecombinantis0155IU/mLafteroptimizingthefermentationcondition.Keywords:RT2PCR;Trich
6、odermareeseiXYN2gene;Saccharomycescerevisia;clone;expression为了应对全球化的能源危机,人们正在寻找新素的木聚糖酶对充分利用自然界的可再生资源生产的替代能源.与石油能源相比较,生物乙醇由于具有乙醇具有重要意义.环保、其生产原料可再生等特点,因此,国内外研发木聚糖酶(xylanases)(EC3.2.1.8)是木聚糖[1]生物乙醇已成为当今的热点.半纤维素作为生物水解酶系中最关键的酶,可水解木聚糖主链骨架的乙醇可再生原料的主要成分,占自然界中植物碳水β21,4木糖苷键.该酶可由以微生物为主的多种生化合物总量的1/3,
7、而木聚糖(xylan)是植物半纤维物合成,包括细菌、黑曲霉、木霉等,其水解产物主要素(hemicellulase)的主要成分,其占单叶和阔叶植为低聚木糖(xylo2oligosaccharides)、少量的木糖和阿[2][2][3]物干质量的35%.因此,研究可降解植物半纤维拉伯糖.laGrange等研究了组成型PGK启动子3收稿日期:2007203220基金项目:国家重点基础研究发展计划(“973”计划)资助项目(2003CB615701);国家自然科学基金资助项目(20336010)作者简介:王向明(1980—),男,江苏
