木聚糖酶活力特性

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1、实用标准文案木聚糖酶活力特性研究郑翔鹏（福建省燕京惠泉啤酒股份有限公司）概况木聚糖酶分子只含一个亚基，分子量在8～30kD间的为碱性蛋白，分子量在30～145kD间的为酸性蛋白。PI值为3～10.5，稳定pH值为3～10，反应最适pH值在4～7之间，最适温度为40～60℃。离子通过改变酶的构象影响木聚糖酶的稳定性，一般情况下,Ag+(离子浓度1mmol·L-1,抑制酶活达100%)、Hg2+(离子浓度1mmol·L-1,抑制酶活达7013%)、Cu2+(离子浓度2.00mg·ml-1,抑制酶活达25.42%)等离子抑制木聚糖酶的活性,Mg2+(离子浓度2.0

2、0mg·ml-1,提高酶活达6%)、Mn2+(离子浓度1mmol·L-1,提高酶活达24%)等离子则能提高木聚糖酶的活性。Ag+、Hg2+、Cu2+等离子主要通过改变酶分子中2SH基团的还原态或直接攻击酶分子中的某些氨基酸残基,改变酶的构象来抑制木聚糖酶的活性，Mg2+、Zn2+等则通过影响酶与底物的结合及解离状态,提高酶的活性,其具体机制还有待进一步研究。木聚糖酶的分子结构由功能结构域和连接区构成。其中，功能结构域由催化结构域和纤维素结合结构域构成，纤维素结合结构域可改变酶对可溶或不溶底物的活力。根据结构域的相似性，木聚糖酶可通过结构域的改组和随后结构域的

3、修饰而进，许多木聚糖酶具有纤维素酶的活性。木聚糖酶与木聚糖的结合利用离子间的静电作用。木聚糖含有的4-O-甲基葡糖醛酸带负电，木聚糖酶在pH低于PI时带正电荷，易于结合，而在pH值高于PI时，则不易结合。其反应为典型的酸碱亲核水解反应。 木聚糖酶特性分析在对木聚糖酶的特性分析中，着重分析酶活力与温度、PH值、钙离子对酶活力的影响。1.1木聚糖酶活力分析对于木聚糖酶活力的分析，国标中没有相应的推荐方法。目前，主要采用分光比色测定反应液颜色的强度来定量分析酶的活力。木聚糖酶活力单位是指在50℃、pH值为5.3的条件下，每分钟从浓度为10mg/ml的木聚糖溶液中降

4、解释放1μmol还原糖所需要的酶量为一个酶活力单位U。1.1.1分析原理木聚糖酶能将木聚糖降解成寡糖和单糖。具有还原性末端的寡糖和有还原基团的单糖在沸水浴条件下可以与DNS试剂发生显色反应。反应液颜色的强度与酶解产生的还原糖量成正比，而还原糖的生成量又与反应液中木聚糖酶的活力成正比。1.1.2主要试剂（略）1.1.3标准曲线的绘制吸取水1.0ml，加入DNS试剂3.0ml，沸水浴加热5min。用自来水冷却至室温，制成标准空白样。分别吸取木糖溶液1.00、2.00、3.00、4.00、5.00ml，分别用水定容至100ml，配制成浓度为0.10～0.50mg/

5、ml木糖标准溶液。分别吸取上述浓度系列的木糖标准溶液各1.00ml（做二个平行），分别加入到刻度试管中，再分别加入3mlDNS试剂。电磁振荡3s，沸水浴加热5min。然后用自来水冷却到室温，以标准空白样为对照调零，在540nm处测定吸光度OD值。以木糖浓度为Y轴、吸光度OD值为X轴，绘制标准曲线。每次新配制DNS试剂均需要重新绘制标准曲线。1.1.4样品制备精彩文档实用标准文案固体试样应粉碎或充分碾碎，然后过60目筛（孔径为0.25mm）。液体试样可直接称取。称取试样，精确至0.001g。加入250ml乙酸-乙酸钠缓冲溶液。磁力搅拌30min，再用缓冲溶液定

6、容至500ml，在4℃条件下避光保存12h，过滤。再用缓冲溶液做二次稀释（稀释后的待测酶液中木聚糖酶的活力最好能控制在0.04～0.08U/ml之间）。1.1.5测定吸取10.0ml木聚糖溶液，50℃平衡10min。吸取10.0ml经过适当稀释的酶液，50℃平衡10min。吸取1.00ml经过适当稀释的酶液（已经过50℃平衡），加入到刻度试管中，再加入1.0ml木聚糖溶液，50℃保温30min，立即加入3.0ml的DNS溶液混匀，沸水浴加热5min（从试管放入重新沸腾时算起）。用自来水冷却至室温，在540nm处测定吸光度A。吸取1.00ml木聚糖溶液（已经过

7、50℃平衡）,加入到刻度试管中，50℃精确保温30min。加入3.0mlDNS试剂和1.00ml经过适当稀释的酶液，混匀，以终止酶解反应。沸水浴加热5min（从试管放入重新沸腾时算起），用自来水冷却至室温，在540nm处测定吸光度A0。1.1.6计算r×Df木聚糖酶活力（U/g）＝×1000150.14×t式中：r：通过OD值从标准曲线上查得与标准木糖溶液相对应的浓度（ug/ml）；150.14：木糖的相对分子质量；t：酶解反应时间，min；Df：稀释倍数酶活力的计算值保留三位有效数字。1.1.7结果分析本研究分析了8种各酶制剂厂家提供的复合木聚糖酶的活力，

8、具体见表1。木聚糖酶的活力含量在12598~2402