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1、苦养种子总黄酮提取方法比较探究摘要：目的比较不同方法提取苦养种子总黄酮的效果。方法分别用乙醇回流提取法、微波辅助提取法、超声波提取法、碱水浸提法及热水浸提法提取苦养种子总黄酮，用高效液相色谱法测定总黄酮含量，计算提取产率。结果乙醇回流提取法提取总黄酮产率最高，微波和超声波提取法次之，碱水和热水浸提法最低。结论微波提取法具有明显的高效性，适于大量提取苦养种子总黄酮。关键词：苦养；总黄酮：高效液相色谱法中图分类号:R735.1文献标识码：A文章编号1672-979X(2010)03-0093-03黄酮类物质是具有广泛生物活性的植物次生代谢
2、产物，人体不能自身合成，主要从植物中摄取。研究表明，生物类黄酮具有多种药用功效。苦养茎、叶、花、果实均含有丰富的黄酮类物质，主要以芸香昔形式存在。目前，提取苦养总!1!黄酮的方法有水提法、乙醇热浸提法、超声波法以及微波提取法等。研究者虽分别研究了其最佳提取工艺，但提取方法之间的比较研究报道较少。本实验以芦丁和栩皮素为对照品，用高效液相色谱法进行定性定量测定和比较，系统研究了提取苦养种子总黄酮较常用的5种方法，从黄酮含量、产品得率等方面分析5种方法对苦养种子总黄酮提取的影响,以确定既高效且实用的最佳提取方法，以期为苦养种子总黄酮的工业化
3、生产及功能研究提供理论依据。1材料与仪器1.1材料与试剂an苦养（Fagopyrumtataricum,贵州威黑养）：芦丁对照品、楓皮素对照品（中国药品生物制品检验所）；甲醇（色谱纯）；其他试剂均为国产分析纯。1.2仪器WP750L23-6微波炉（广东格兰仕公司）;Scientz.llD超声破碎仪（宁波新芝生物科技公司）：SHBoIII水循环式真空泵（郑州长城科工贸公司）:旋转蒸发器RE-52（上海亚荣生化仪器厂）;低温水浴箱（PloyStatCCI,Germany）;Scientz-12N真空冷冻干燥机（宁波新芝生物科技公司）;Wa
4、tersl525型高效液相色谱仪（美国Waters公司）；Waters2487检测器。2实验方法2.1苦养种子总黄酮的提取2.1.1样品前处理将养麦种子置入809烘箱，烘8~12h,取出置入干燥器冷却至室温。称取适量苦养种子置入搅拌破碎器破碎，去壳，过40目筛，过筛粉末乙用。2.1.2乙醇回流提取法（索式提取法）称取脱脂的养麦粉末10.00g,精密称定，置入索式提取器，加入70%乙醇200mL,水浴909,抽提10h,至回流液无色。合并提取液，减压浓缩至少量，冷冻干燥，得粗提物。2.1.3微波提取法称取脱脂的养麦粉末10.00g＞密称
5、定，置入微波炉，加入70%乙醇200mL,微波处理150s,功率300W,控制温度低于60°Co抽滤，滤液减压浓缩至少量，冷冻干燥，得粗提物。2.1.4超声提取法称取脱脂的养麦粉末10.00g,精密称定，置入超声破碎仪，加入70%乙醇200mL,超声破碎处理30min,超声频率20kHz,每工作7s暂停3s,温度25°Co抽滤，滤液减压浓缩至少量，冷冻干燥，得粗提物。2.1.5碱水提取法称取脱脂的养麦粉末10.00g,精密称定，置入250mL烧杯，加入pH8.5的氢氧化钠溶液200mL,509提取4h。抽滤提取液，滤液减压浓缩至少量，
6、冷冻干燥，得粗提物。2.1.6热水浸提法称取脱脂的养麦粉末10.00g密称定，置入250mL烧杯，加入蒸馆水200mL,509提取4ho提取液抽滤，滤液减压浓缩至少量，冷冻干燥，得粗提物。2.2HPLC法测定苦养黄酮的含量2.2.1溶液配制称取芦丁和栩皮素对照品各10mg,分别精密称定，甲醇溶解完全后转入50mL容量瓶，用甲醇稀释至刻度，得浓度0.2mg/mL对照品溶液。准确称取用5种提取方法获得的样品适量，同法制得供试品溶液。2.2.2色谱条件色谱柱:DiamonsilC18柱(5pm,200mmx4.6mm);流动相:CH30H-
7、0.4%H3P04(50:50,v/v);流速1.0mL/min;检测波长254nm:柱温25°CO2.2.3测定方法分别精密吸取0.2mg/mL的芦丁和0.2mg/mL栩皮素对照品溶液各4,8,12,16,20pL注入液相色谱仪测定，以进样量(pg)为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程。分别精密吸取不同批次供试品溶液各10pL注入液相色谱仪测定，代入回归方程，即可获得样品中芦丁和糊皮素含量。3结果3.1对照品的HPLC分离以芦丁和梆皮素为对照品，检测提取的粗提物，HPLC图见图1o根据HPLC的分析结果，绘制标准曲线，
8、用最小二乘法进行线性回归，得出2种对照品的回归方程，据此计算供试品中芦丁和楓皮素含量。3.2样品测定按照5种方法提取苦养麦总黄酮，用HPLC分析。黄酮含量以芦丁为对照品计算，公式如下：提取产率二（粗提物中黄酮总量/苦养种
