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《溶血磷脂酸通过RhoA-YAP通路调控脂肪干细胞增殖的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、骨科2016年11月第7卷第6期Orthopaedics,November2016,Vol.7,No.6·429··实验研究论著·溶血磷脂酸通过RhoA⁃YAP通路调控脂肪干细胞增殖的研究叶亚平李觅吴颖星黄俊明印卫锋郭风劲【摘要】目的探讨溶血磷脂酸（lysophosphatidicacid,LPA）调控脂肪干细胞（adipose⁃derivedstemcells,ASCs）增殖的作用及其分子机制。方法分离SD大鼠ASCs，利用LPA对其进行干预，干预时间为1h，采用WesternBlot检测YES相关蛋白（yesassociatedprotein,YA
2、P）、结缔组织生长因子（connectivetissuegrowthfactor,CTGF）蛋白表达水平。利用免疫荧光检测YAP亚细胞定位，逆转录聚合酶链反应（reversetranscriptionpolymerasechainreaction,RT⁃PCR）检测CTGF和Ankrd1的mRNA表达水平。慢病毒转染ASCs，WesternBlot检测不同分组YAP蛋白表达。进一步利用流式细胞术和CCK⁃8法检测不同分组中ASCs增殖情况。最后采用RhoA抑制剂C3干预，免疫荧光检测不同分组中YAP亚细胞定位，WesternBlot检测YAP、CTGF
3、和GTP⁃RhoA的表达情况。结果LPA能显著促进YAP的表达和在细胞核内的聚集，同时LPA也能够促进YAP靶基因CTGF在蛋白水平的表达。LPA能上调YAP靶基因CTGF和锚蛋白重复域1（ankyrinrepeatingdomain1,Ankrd1）的mRNA表达水平。慢病毒转染敲除YAP表达后，LPA对YAP的上调作用被明显抑制。细胞周期流式细胞术和CCK⁃8检测结果显示LPA可显著促进ASCs的增殖，但在shYAP慢病毒转染特异性敲除YAP后，LPA对ASCs的促增殖能力被明显削弱。RhoA抑制剂C3处理后，LPA对YAP细胞核聚集的促进作用被削
4、弱，同时LPA对YAP、CTGF和GTP⁃RhoA表达的促进作用也得到了明显抑制。结论LPA能够通过RhoA⁃YAP通路调控ASCs的增殖。【关键词】溶血磷脂酸；脂肪干细胞；RhoA⁃YAP通路；细胞增殖Lysophosphatidicacidregulatestheproliferationofadipose⁃derivedstemcellsviatheRhoA/YAPsignalingpathway.YEYaping,LIMi,WUYingxing,HUANGJunming,YINWeifeng,GUOFengjin.Depart⁃mentofOr
5、thopaedics,TongjiHospital,TongjiMedicalCollege,HuazhongUniversityofScienceandTechnology,Wuhan430030,ChinaCorrespondingauthor:GUOFengjin,E⁃mail:fjguo@tjh.tjmu.edu.cn【Abstract】ObjectiveTostudytheroleandmolecularmechanismoflysophosphatidicacid(LPA)inregulatingadipose⁃derivedstemcel
6、ls(ASCs)proliferation.MethodsASCswereisolatedfromSDratsandtreatedwithLPAfor1h.WesternblottingwasappliedtodetecttheexpressionofYAPandCTGFproteins.ImmunofluorescencestainingwasperformedtodetectYAPsubcellularlocalization.RT⁃PCRwasusedtodetecttheexpressionsofYAPtargetgenesCTGFandAnk
7、rd1.WesternblottingwasdonetodetectYAPproteinexpressionafterlentivirustransfection.FlowcytometryandCCK⁃8assaywerecarriedouttodetecttheprolifera⁃tionofASCsindifferentgroups.Finally,RhoAinhibitorC3wasutilizedandYAPwassubcellularlylocalizedbyimmunofluorescencestaining.Theexpressiono
8、fYAP,CTGFandGTP⁃RhoAwasexaminedbyWesternblot⁃ti
