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《乙醇脱氢酶Ⅰ基因敲除的酿酒酵母重组菌构建的初步研究》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、万方数据万方数据万方数据图D所示,lOOug/ml时,酿酒酵母没有生长。图1潮霉素最低杀伤浓度图Fig.1Minimuminh.bitoⅣconcentratiOnofHygromycintoye髂tM为分子量标准(DL2000,天为时代);泳道l和2均为所扩增的样品其分子量为l116bp。圈2PCR扩增潮霉素基因片段凰Fig。2AmpIIfiedDNAfragmentofhygromycIn9eneusingPC只A为空白对照,涂布有野生酵母HDY.Ol,B为转化后平板,涂布有转化后的HDY.01。A、B上潮霉素浓度为100ug,ml。图3PCR产物直接转化HDY.01后的筛选结果Fig.
2、3Sc怕ening怕suItOftransfO丌T1ationOfPCRtoHDY-01M为分子量标准(DL2000,天为时代);泳道l和2均为扩增的样品分子量为1023bp。图4以HyBl和H[yB2为引物扩增转化酵母基因组结果Fig.4Amp娟edDNAf限gmentOfyeastgenOmewithprimefSHyBl鲫dHyB2筛选抗性菌落。结果显示(图3),有部分菌株可以在含有潮霉素的平板上生长,表明其体内含有潮霉素抗性,而在空白对照平板上(未涂有100pg,ml潮霉素)没有菌落生成。利用酵母基因组提取试剂盒,提取转化后酵母及野生酵母的基因组DNA,以HyBl和HyB2引物进行P
3、CR扩增。结果发现(图4),在酵母基因组上,扩增出本实验所需要的片段1026bp,说明外源基因已经整合到酵母基因组上。2.5发酵实验将野生菌株和转化菌株经过发酵后,通过检测其中的乙醛和乙醇含量,确定ADHI基因被敲除的情况。初步研究结果表明,发酵5d时,原始菌株的乙醛含量为0.466mg,L,而转化子的乙醛含量平均值为O.550mg,L,均小于成熟优质啤酒中乙醛含量(3~8mg/L)嘲,说明转化子中乙醛含量是合格的。原始菌株的乙醇含量为5.1%(v,v),而转化子的乙醇含量平均值为1.8%(v/v),较原始菌株低了65%,说明转化菌株体内乙醇生成途经受到干扰。虽然经PCR验证潮霉素基因已经整
4、合到野生菌株体内,但是其是否完全取代ADHI还需要迸一步验证。从啤酒厂发酵生产啤酒的工艺角度来看,发酵5d时,正是各项检测指标值比较高的时期,尤其是乙醛含量,这说明,本实验通过基因敲除得到的转化子可以满足工厂发酵的需要。参考文献:【l】【2】【3】【4】圄【6j严加伟.啤酒百科【M】.北京:航空工业出版社,1993.菜会英,王进,张伟.无醇啤酒的研制开发【J】.酿酒,2001(1):49.赵丽娟。王德良,程玉来,等.利用基因敲除技术破坏酿酒酵母乙醇脱氢酶Ⅱ基因的初步研究【J】.食品与发酵工业,2005,31(11):30.33.张延平,刘铭,曹竹安.醛脱氢酶基因敲除的置_pneⅣm重组菌的构
5、建叨.中国生物工程杂志,2005,25(12):34—38.萨姆布鲁克J,拉塞尔DW.分子克隆实验指南【M】.3版.黄培堂,等译.北京:科学出版社,2002.葛邦国。王德良,傅力。等.啤酒酵母中乙醇脱氢酶I的扩增与表达们.农产品加工:学刊,2005(8):24—27.乙醇脱氢酶Ⅰ基因敲除的酿酒酵母重组菌构建的初步研究作者:葛菁萍,宋刚,孙宗祥,凌宏志,蔡柏岩,刘松梅,平文祥,GEJing-ping,SONGGang,SUNZong-xiang,LINGHong-zhi,CAIBai-yan,LIUSong-mei,PINGWen-xiang作者单位:黑龙江大学,微生物黑龙江省高校重点实验室,
6、黑龙江,哈尔滨,150080刊名:食品科学英文刊名:FOODSCIENCE年,卷(期):2008,29(2)被引用次数:0次参考文献(6条)1.严加伟啤酒百科19932.菜会英.王进.张伟无醇啤酒的研制开发2001(01)3.赵丽娟.王德良.程玉来利用基因敲除技术破坏酿酒酵母乙醇脱氢酶Ⅱ基因的初步研究[期刊论文]-食品与发酵工业2005(11)4.张延平.刘铭.曹竹安醛脱氢酶基因敲除的K.pneum重组菌的构建[期刊论文]-中国生物工程杂志2005(12)5.萨姆布鲁克·J.拉塞尔DW.黄培堂分子克隆实验指南20026.葛邦国.王德良.傅力啤酒酵母中乙醇脱氢酶Ⅰ的扩增与表达[期刊论文]-农产
7、品加工·学刊2005(08)相似文献(10条)1.学位论文陆晓慧工业酿酒酵母F菌株ald<,6>基因敲除的研究2007乙酸作为挥发酸的重要组成部分,含量过多是造成啤酒偏酸的主要因素。酿酒酵母染色体上ald。基因编码的乙醛脱氢酶是控制乙酸发酵的关键酶,乙醛脱氢酶的活性高时乙酸产生的量多。本论文采用敲除酿酒酵母染色体上部分或全部ald<,6>基因的方法得到ald<,6>基因缺陷型改良菌株。改良后的酿酒酵母在酿造啤
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