乙醇脱氢酶Ⅰ基因敲除的酿酒酵母重组菌构建的初步研究

《乙醇脱氢酶Ⅰ基因敲除的酿酒酵母重组菌构建的初步研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、万方数据万方数据万方数据图D所示，lOOug／ml时，酿酒酵母没有生长。图1潮霉素最低杀伤浓度图Fig．1Minimuminh．bitoⅣconcentratiOnofHygromycintoye髂tM为分子量标准(DL2000，天为时代)；泳道l和2均为所扩增的样品其分子量为l116bp。圈2PCR扩增潮霉素基因片段凰Fig。2AmpIIfiedDNAfragmentofhygromycIn9eneusingPC只A为空白对照，涂布有野生酵母HDY．Ol，B为转化后平板，涂布有转化后的HDY．01。A、B上潮霉素浓度为100ug，ml。图3PCR产物直接转化HDY．01后的筛选结果Fig．

2、3Sc怕ening怕suItOftransfO丌T1ationOfPCRtoHDY-01M为分子量标准(DL2000，天为时代)；泳道l和2均为扩增的样品分子量为1023bp。图4以HyBl和H[yB2为引物扩增转化酵母基因组结果Fig．4Amp娟edDNAf限gmentOfyeastgenOmewithprimefSHyBl鲫dHyB2筛选抗性菌落。结果显示(图3)，有部分菌株可以在含有潮霉素的平板上生长，表明其体内含有潮霉素抗性，而在空白对照平板上(未涂有100pg，ml潮霉素)没有菌落生成。利用酵母基因组提取试剂盒，提取转化后酵母及野生酵母的基因组DNA，以HyBl和HyB2引物进行P

3、CR扩增。结果发现(图4)，在酵母基因组上，扩增出本实验所需要的片段1026bp，说明外源基因已经整合到酵母基因组上。2．5发酵实验将野生菌株和转化菌株经过发酵后，通过检测其中的乙醛和乙醇含量，确定ADHI基因被敲除的情况。初步研究结果表明，发酵5d时，原始菌株的乙醛含量为0．466mg，L，而转化子的乙醛含量平均值为O．550mg，L，均小于成熟优质啤酒中乙醛含量(3～8mg／L)嘲，说明转化子中乙醛含量是合格的。原始菌株的乙醇含量为5．1％(v，v)，而转化子的乙醇含量平均值为1．8％(v／v)，较原始菌株低了65％，说明转化菌株体内乙醇生成途经受到干扰。虽然经PCR验证潮霉素基因已经整

4、合到野生菌株体内，但是其是否完全取代ADHI还需要迸一步验证。从啤酒厂发酵生产啤酒的工艺角度来看，发酵5d时，正是各项检测指标值比较高的时期，尤其是乙醛含量，这说明，本实验通过基因敲除得到的转化子可以满足工厂发酵的需要。参考文献：【l】【2】【3】【4】圄【6j严加伟．啤酒百科【M】．北京：航空工业出版社，1993．菜会英，王进，张伟．无醇啤酒的研制开发【J】．酿酒，2001(1)：49．赵丽娟。王德良，程玉来，等．利用基因敲除技术破坏酿酒酵母乙醇脱氢酶Ⅱ基因的初步研究【J】．食品与发酵工业，2005，31(11)：30．33．张延平，刘铭，曹竹安．醛脱氢酶基因敲除的置_pneⅣm重组菌的构

5、建叨．中国生物工程杂志，2005，25(12)：34—38．萨姆布鲁克J，拉塞尔DW．分子克隆实验指南【M】．3版．黄培堂，等译．北京：科学出版社，2002．葛邦国。王德良，傅力。等．啤酒酵母中乙醇脱氢酶I的扩增与表达们．农产品加工：学刊，2005(8)：24—27．乙醇脱氢酶Ⅰ基因敲除的酿酒酵母重组菌构建的初步研究作者：葛菁萍，宋刚，孙宗祥，凌宏志，蔡柏岩，刘松梅，平文祥，GEJing-ping，SONGGang，SUNZong-xiang，LINGHong-zhi，CAIBai-yan，LIUSong-mei，PINGWen-xiang作者单位：黑龙江大学,微生物黑龙江省高校重点实验室,

6、黑龙江,哈尔滨,150080刊名：食品科学英文刊名：FOODSCIENCE年，卷(期)：2008，29(2)被引用次数：0次参考文献(6条)1.严加伟啤酒百科19932.菜会英.王进.张伟无醇啤酒的研制开发2001(01)3.赵丽娟.王德良.程玉来利用基因敲除技术破坏酿酒酵母乙醇脱氢酶Ⅱ基因的初步研究[期刊论文]-食品与发酵工业2005(11)4.张延平.刘铭.曹竹安醛脱氢酶基因敲除的K.pneum重组菌的构建[期刊论文]-中国生物工程杂志2005(12)5.萨姆布鲁克·J.拉塞尔DW.黄培堂分子克隆实验指南20026.葛邦国.王德良.傅力啤酒酵母中乙醇脱氢酶Ⅰ的扩增与表达[期刊论文]-农产

7、品加工·学刊2005(08)相似文献(10条)1.学位论文陆晓慧工业酿酒酵母F菌株ald<,6>基因敲除的研究2007乙酸作为挥发酸的重要组成部分，含量过多是造成啤酒偏酸的主要因素。酿酒酵母染色体上ald。基因编码的乙醛脱氢酶是控制乙酸发酵的关键酶，乙醛脱氢酶的活性高时乙酸产生的量多。本论文采用敲除酿酒酵母染色体上部分或全部ald<,6>基因的方法得到ald<,6>基因缺陷型改良菌株。改良后的酿酒酵母在酿造啤