GAL3敲除对酿酒酵母生理及乙醇发酵性能的影响.pdf

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1、巧古学位化义，．■，．（ＧＬ４以敲除对酿酒酵母生理及乙醇发酵性能的影响＇Ｖ－？；？＊■；ｆ，ｉ占．ｖｉ．Ｊ．＇Ｉ．练梅华廣席乂聲二０—五年五月分类号０％密级公开ＵＤＣ编号硕壬学位论文Ｇ４王３敲除对酿酒酵母生理及乙醇发酵性能的影响学科专业牛物化学与分子生物学指导老师黄日波教授论文答辩日期２（Ｈ５年５月巧日学位授予日期２０１５年６月３０日答辩委员会主席唐东阶研究员广西大学学位论文原创性和使用授枚齊明本人声明所呈交的论文，是本人在导师的指导下

2、独立进行研究所取得的研究成果。除已特别加标注和致谢的地方外，论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的研究成果，也不包含本人或他人一为获得广西大学或其它单位的学位而使用过的材料。与我同工作的同事对本论文的研究工作所做的贡献均已在论文中作了明确说明。本人在导师指导下所完成的学位论文及相关的职务作品，知识产权归属广西大学，即；。本人授权广西大学拥有学位论文的部分使用权学校有权保存并向国家有关部口或机构送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被査阅和借阅，可Ｗ将学位论文的全部或部分巧容编入有关数据库进行检索和传播，可Ｗ采用影印、缩印或

3、其它复制手段保存、汇编学位论文。本学位论文属于：□保密，在年解密后适用授权。囚不保密。请在上相应方框内打‘‘Ｖ’’（）：术妹如抒＆论文作者签名條日期＞＆指导教师签名备ｙ曰期＇参訓Ｊ：？＾始ｂ作者联系电话：练梅半芋邮箱；敲除对酿酒薛母生理及乙醇发薛性能的影响摘要Ｇ乂Ｕ基因在真核生物中广泛存在。酵母同样为真核生物，与人类的基因具有相关性，可Ｗ作为人类基因功能研究的参考，而且是单细胞一，具有生活史短，容易培养等优点。人类的历史同样是部酿酒。如今的社会早已与乙醇无法割舍酿造史。石醇除了用于人们的日常饮食外，同

4、时还用于医药、化工、食品等行业。酿酒酵母的基因功能一直是研究的重点与热点及发酵性能。酿酒酵母基因（ＯＲＦ编号为Ｇ乂Ｕ）编码表达ＧＡＬ３ｐ，是一酿酒酵巧半魏糖代谢中个感应和信号传导的基因。在半乳糖为唯一碳源的培养基中，在ＡＴＰ的协助下，ＧＡＬ３蛋白能与酵母半乳糖代谢中的抑制因子ＧＡＬ８０结合，从而使转录激活因子ＧＡＬ４能够转录使酵母半乳糖代谢能够顺利进行。本文ＷＭＦ１０１５为出发菌株，构建两种单倍体菌株并通过同源重组敲除两种单倍体的ＧＡＬ３基因，再将一敲除的单倍体菌株进行复倍，得到株ＧＬ４Ｚ３突变体茵株，研究其生理特征Ｗ及己醇发酵

5、特性。本实验构建了ＭＦ１０１５菌株的ａ型和ａ型单倍体，并合成仿仏Ｊ基Ｉ因敲除组件，成功将Ｇ乂Ｕ基因敲除组件转入两种单倍体中。利用敲除组件中的Ｇ４１８抗性进行筛选，得到敲除基因后的单倍体突变菌株，然后转入ｐＳＨ６５表达质粒，利用半乳糖诱导消除Ｇ４１８抗性基因，再传代遗失得到丢失ＰＳＨ６５质粒的突变茵株。将两种单倍体突变体菌株接入到ＹＰＤ培养基让其自然交配并复倍，从而得到突变Ｆ－体Ｍ１０１５ＪＧ４ｉＪ。测定野生型菌株和突变体菌株的基本生理状态及玄醇发酵性能，与野生型菌株相比，突变体茜株生长速率变慢，细胞，形态由近似圆形变成

6、楠圆形，呼吸作用降低，耐乙酸能力有明显升高耐艺醇能力略有降低，对葡萄糖、廉糖、棉巧糖、乳糖、半乳；同时糖等糖的利用能力也略有降低。在环境中同时存在葡萄糖和半郭糖时，葡萄糖耗尽后，，野生型菌株优先利用葡萄糖野生型菌株对半乳糖利用会延迟６小时左右，送种现象称为葡萄糖阻遏。而敲除位ｉＵ？基因的突变体菌株这种延迟达２５天，并且其耐半乳糖的耐受性也降低。在糖蜜补料发酵实验中，野生型和突变体发酵产生的乙醇最大浓度分别为〇３．１３±０．１８）％和（１２．７６±０．１７）％，其中对糖的利用率１．６％。野生型高在薦糖发酵实验中，野生型产生己醇浓度为

7、（１４．０５±０．２８）％．０．）％Ｇ４２Ｊ，突变型为（１３２±０５８。结果说明突变对于酿酒酵巧的生理特征Ｗ及玄醇发酵均有影响。关键词：ＧＡＬ５同源重組基因敲除半乳糖代谢生理特征酿酒酵母打ＰＨＹＳＩＬＯＧＹＡＮＤＥＴＨＡＮＯＬＦＥＲＭＥＮＴＡＴＩＯＮｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆＧＡＬ３ＫＮＯＣＫＯＵＴＩＮＹＥＡＳＴＡＢＳＴＲＡＣＴ仿ｉＵｇｅｎｅｅｘｉｓｔｓｅｘｔｅｎｓｉｖｅｌｙｉ打ｅｕｋａｒｙｏｔｅｓ．Ｙｅ犯ｔｉｓａｌｓｏ化ｅｅｕｋａｒｙｏｔｅｓ．Ｔｈｅｅｎｅｓｏｆｈｕｍａｎｓａｎｄ

8、ｏｔｈｅｒ