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1、桐乡恒基生物有限公司TONGXIANGHENGJIBIOTECHNOLOGYCO.,LTD.文件标题微生物限度检查标准操作规程页数7页文件编码QC-GL-S0P-001-01分发部门颁发部门行政部质检部起輦人口期审核人日期批准人口期执行U期变更记载修订号批准日期执行日期变更原因及目的1.目的规范微生物限度检杳程序，特制定本规程。2.范围本公司微生物限度的检查3.责任人微生物限度检查人员4.内容4.1常用检验设备及器材：恒温培养箱30〜35°C36±1°C霉菌培养箱25〜28°C净化工作台电热干燥箱水浴锅45°
2、C高压蒸汽消毒器分析天平锥形瓶100ml,250ml,500ml,1000ml。单刻度吸管linl,10ml试管13X100mm量筒100ml,500ml,1000ml酒精灯4.2培养基及制备方法除另有规定外，培养基制备的灭菌条件为121°C灭菌20分钟。4.2.1营养琼脂培养基与营养肉汤培养基灭菌条件为115°C灭菌30分钟。（屮国药典2005年版附录VIB）o4.2.1.1营养肉汤培养基蛋白腺10g牛肉浸液1000ML氯化钠5g取蛋白月东和氯化钠加入牛肉浸液内，加热微温溶解后，氢氧化钠调节PH使灭菌后为7
3、.2±0.2煮沸，滤清,分装，115°C灭菌30分钟。4.2.1.2营养琼脂培养基照上述营养肉汤培养基的处方及制法，加入15—20克琼脂，调节PH值使灭菌后为7.2±0.2,分装，115°C灭菌30分钟。玫瑰红钠琼脂培养基蛋白豚5g玫塊红钠0.0133g葡萄糖10g琼脂15〜20g磷酸二氢钾lg纯化水1000ml硫酸镁0.5g除葡萄糖、玫瑰红钠外，取上述成分，混合，加热溶化后，滤过，加入葡萄糖、玫瑰红钠，分装，灭菌。4.3酵母浸出粉月东荊萄糖琼脂培养基（YPD）蛋白月东10g琼脂15〜20g酵母浸出粉5g纯化
4、水1000ml葡萄糖20g除葡萄糖外，取上述成分，混合，加热溶化后，滤过，加入葡萄糖，分装，灭菌。4.4胆•盐乳糖培养基（BL）蛋白月东20g磷酸二氢钾1.3g乳糖5g牛胆盐（或去氧胆酸钠0.5g）2g氯化钠5g纯化水1000ml磷酸氢二钾4.0g除乳糖、牛胆盐外，取上述成分，混合，加热使溶解，调节pH值灭菌后为7.4±0.2,煮沸，滤清，加入乳糖、牛胆盐，分装，灭菌。4.5曙红亚中蓝琼脂培养基（EMB）营养琼脂培养基100ml曙红钠指不液2ml20%乳糖溶液5m1亚中蓝指示液1.3~1.6m1取营养琼脂培养
5、基，加热溶化后，冷至60°C,按无菌操作加入灭菌的其他3种溶液,摇匀，倾注平皿。4.6麦康凯琼脂培养基（MacC）蛋口腺20g1%中性红指示液3ml乳糖10g琼脂15〜20g牛胆盐5g纯化水1000ml氯化钠5g除乳糖、指示液、牛胆盐及琼脂外，取上述成分，混合，加热使溶解，调节pH值使灭菌后为7.2±0.2,加入琼脂，加热溶化后，再加入其余各成分，摇匀，分装，灭菌，冷至约60°C,倾注平皿。4.74-屮基伞形酮葡糖甘酸(4-Mcthylumbel1ifcryl-3-IHGlucuronide,MUG)培养基蛋
6、白月东10g磷酸二氢钾0.9g硫酸钱5g磷酸氢二钠（无水）6.2g硫酸卡孟0.5mg亚硫酸钠40mg硫酸锌0.5mg去氧胆酸钠lg硫酸镁0.lgMUG75mg氯化钠log纯化水1000ml氯化钙50mg除MUG夕卜，各成分溶解于1000ml纯化水中，调节pH值使灭菌后为7.3±0.1,加入MUG,溶解后，每管分装5ml,115°C灭菌20分钟。4.8蛋白月东水培养基水1000mllOg胰蛋门月东氯化钠5g取上述成分，混合，加热溶化，调节pH值使灭菌后为7.3±0.1,分装于小试管，121°C灭菌20分钟。4.
7、9磷酸盐葡萄糖腺水培养基蛋白豚7g磷酸氢二钾3.8g葡萄糖5g纯化水1000ml取上述成分，混合，微温使溶解，调节pH值使灭菌后为7.3±0.1,分装于小试管，121°C,灭菌15分钟。4.10枸椽酸盐培养基氯化钠5g枸椽酸钠（无水）2g硫酸镁0.2g澳麝香草酚蓝指示液20ml磷酸氢二钾l.Og琼脂15〜20g磷酸二氢较lg水1000ml除指示液和琼脂外，取上述成分，混合，微温使溶解，调节pH值使灭菌后为6.9±0.1,加入琼脂，加入指示液，混匀，分装于小试管，灭菌，置成斜面。注：所用琼脂应不含游离糖，用前用
8、水浸泡冲洗。试液1.玫瑰红钠试液取玫瑰红钠0.lg,加纯化水使溶解成75mlo2.靛基质试液取对二叩氨基苯叩醛5.0g,加入戊醇（或丁醇）75ml，充分振摇，使完全溶解后，再取浓盐酸25ml徐徐滴入，边加边振摇，以免骤热导致溶液色泽变深，或取对二甲氨基苯甲醛l.Og,加入95%乙醇95ml,充分振摇，使完全溶解后，取浓盐酸20ml徐徐滴入。3.a—奈酚乙醇试液取a—奈酚6。0克，加无水乙醇溶解使成1
