(精选)微生物限度检查标准操作规程

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1、微生物限度检查标准操作规程■1.日的：建立微生物限度检查的基本操作，为微生物检杳人员提供正确的操作规程。■2.依据：《中华人民共和国药典》2010年版二部。中华人民共和国卫生部《药品卫生检验方法》■3.范围：木标准适用于QC化验室的微生物限度检杳。■4.职责：QC微生物检验员对本标准的实施负责。■5.程序：■5.1.定义：微牛物限度检查法：微牛•物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微牛物污染程度的方法。■5.2.实验用具：■电热恒温培养箱、电热恒温水温箱、试管、刻度吸竹、量筒、三用瓶、培养皿、试管架、注射器、针头、注射器盒、研钵、7

2、5%酒精棉球、紫外灯（365mn波长）。■5.3.培养基：■531.营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、胆盐乳糖培养基、麦康凯琼脂培养基、枸椽酸盐培养基、磷酸盐葡萄糖H东水培养基、蛋口月东水培养基、4-甲基金形酮葡萄糖昔酸（MUG）培养基。■5.32培养基的管理、配置应符合检定菌、培养基管理规程、培养基配置规程。■5.4.试液：甲基红试液、a■奈酚乙醇试液、40%氢氧化钾溶液、靛基质试液。■5.5.稀释剂：0.9%无菌氯化钠溶液、PH7.0无菌氯化钠■蛋白东缓冲液。■5.6.供试品溶液的制备：取供试品（供试品如为I司体，置研钵屮研磨成细粉）放入

3、试管中，加入适虽的稀释剂制成1：10浓度的供试品溶液。■5.7.对照用菌液：控制菌检查均应作相应已知菌的对照试验，对照菌株为大肠杆菌[CMCC（B）44102Jo■5.8.检查法：■除另有规定外，细菌的培养温度为30-35°C，霉菌的培养温度为23-28°C,控制菌的培养温度为35-37°Co■5.8.1.细菌、霉菌让数：■5.8.1.1.平皿法■采用平皿法进行菌数测定时，应取适宜的连续2〜3个稀释级的供试液。■取供试液lml,置宜径90mm的无菌平皿屮，注入15〜2（）ml温度不超过45°C的溶化的营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基或酵母浸出

4、粉）1东葡萄糖琼脂培养棊，混匀，凝固，倒置培养。每稀释级每种培养基至少制备2个平板。■阴性対照试验収试验用的稀释液1ml,置无菌平皿中，注入培养基，凝固，倒置培养。每种计数用的培养基各制备2个平板，平均不得有菌牛长。■5.8.1.2.培养和计数除另有规定外，细菌培养48小时，逐日点计菌落数，一•般以48小时的菌落数报告；霉菌、酵母菌培养72小时，逐LI点计菌落数，一般以72小时的菌落数报告；必要时，可适当延长培养时间至5~7天进行菌落计数并报告。菌落蔓延牛长成片的平板不宜计数。点计算各稀释级供试液的平均菌落数，按菌数报告规则报告菌数。若同稀释级

5、两个平板的菌落平均数不小于15,则两个平板的菌落数不能相差1倍或以上。一般营养琼脂培养基用于细菌计数；玫瑰红钠琼脂培养基用于霉菌及酵母菌计数；酵母浸出粉腺葡萄糖琼脂培养基用于酵母菌计数。在特殊悄况下,若营养琼脂培养基上长有霧菌和酵母菌、玫瑰红钠琼脂培养基上长有细菌，则应分别点计霉菌和酵母菌、细菌菌落数。然后将营养琼脂培养基上的每菌和酵母菌数或玫瑰红钠琼脂培养基上的细菌数，与玫瑰红钠琼脂培养基中的霉菌和酵母菌数或营养琼脂培养:基中的细菌数进行比较，以菌落数高的培养基中的菌数为计数结果。■含蜂蜜、王浆的液体制剂，用玫魂红钠琼脂培养基测定霉菌数，用酵

6、母浸岀粉腺匍萄糖琼脂培养基测定酵母菌数，合并计数。■5.8.1.3.菌数报告规则宜选取细菌、醇母菌平均菌落数在3()〜3()()之间的稀禅级，霉菌平均菌落数在30〜100Z间的稀释级，作为菌数报告(取两位有效数字)的依据。■(1)当仅有1个稀禅级的菌落数符合上述规定，以该级的平均菌落数乘以稀释倍数的值报告菌数。(2)当同时有2个稀释级的菌落数符合上述规定时，视两者比值(比值为高稀释级的菌落数乘以稀釋倍数的值除以低稀释级的菌落数乘以稀禅倍数的值)而定。若比值不人于2,以两稀释级的菌落数乘以稀释倍数的均值报告菌数；若比值人于5但不超过5时，以低稀释

7、级的菌落数乘以稀释倍数的值报告菌数；当出现比值大于5,或高稀释级的菌落数大于或等于供稀释级的菌落数等开常情况时，应查明原因再行检查，必要时，应进行方法的重新验证。■(3)当各稀释级的平均菌落数均小于30,以最低稀释级的平均菌落数乘以稀释倍数的值报告菌数。■(4)如各稀释级的平板均无菌落生长，或仅最低稀释级的平板冇菌落生长，但平均菌落数小于1时，以vl乘以最低稀释倍数的值报告菌数。■5.8.1.2.薄膜过滤法■采用薄膜过滤法，滤膜孔径应不大于0.45um,直径一般为5()mmo选择滤膜材质时应保证试品及其溶剂不影响微生物的充分被截留o滤器及滤膜使

8、用应采用适宜的方法灭菌。使用时，应保证滤膜在过滤前后的完整性。水溶性供试液供试液过滤前先将将少量的冲洗液过滤以润湿滤膜。油类供试品，其滤膜和过滤器在使