006 微生物限度检查标准操作规程(药品)

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1、公司标准操作规程编号：STD-SOP－QM－006－00题目微生物限度检查标准操作规程颁发部门分析测试中心制定日期审核日期批准日期分发分析测试中心药品研发部目的：规范微生物限度检查操作法范围：原辅料、口服制型的成品检验或食品检验等职责：分析测试中心对本规程实施负责正文：1.简述——细菌、霉菌、酵母菌计数是检测规定企业单位内的非灭菌制剂污染的活菌数量，是判定药品受到微生物污染程度的重要指标，也是对生产企业的药品、原料、辅料、设备器具、工艺流程，生产环境和操作者的卫生状况进行卫生学评价的综合依据之一。——细菌、霉菌、酵母菌计数均采用平板

2、菌落计数法，这是活菌计数方法之一，也是目前国际上许多国家常用的一种方法。——该方法以在琼脂平板上，每个细菌（营养琼脂）、霉菌（玫瑰红钠琼脂）、酵母菌（玫瑰红钠琼脂或酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂）形成一个独立可见的菌落为计数依据。测定结果只反映在规定条件下所生长的细菌（一群在营养琼脂上发育的嗜中温、需氧和兼性厌氧菌）、霉菌和酵母菌的菌落数。不包括对营养、氧气、温度、Ph和其它因素有特殊要求的细菌、霉菌和酵母菌。——一个细菌、霉菌和酵母菌菌落均可由一个或多个菌细胞形成。因此供试品中所测的菌落数实际为菌落形成单位数（colonyformingu

3、nitg,CFU），而不应理解为细菌、霉菌、酵母菌的个数。——在进行本法测定时，必须严格按本法所规定的条件操作，以免产生实验误第13页共13页差。2.设备、仪器及用具2.1设备2.1.1无菌室2.1.1.1结构和要求无菌室应采光良好、避免潮湿、远离厕所及污染区（面积不超过10m2，高度不超过2.4m）由缓冲间（2个）、操作间组成。——操作间与缓冲间之间应有样品传递箱，出入操作间和缓冲间的门不应直对。——无菌室内应六面光滑平整，能耐受清洗消毒。墙与地面及墙壁、天花板连接处应呈弧形。无缝隙，不留死角。操作间内不应安装下水道。——无菌室内

4、的照明灯应嵌装在天花板内，室内光照应分布均匀，光照度不低于300勒克斯。缓冲间和操作间均应设置紫外线杀菌灯（2～2.5W/m3），紫外杀菌灯距实验台面高度不超过1m，并应定期检查辐射强度，不得低于70µW.㎝-2(1m距离)。不符合要求的紫外杀菌灯应及时更换。2.1.1.2温度、湿度无菌室内温度和相对湿度直接影响紫外杀菌灯杀菌效果，故温度应控制在18～26℃，相对湿度40～60%。操作间或净化工作台的洁净空气应保持对环境形成正压、不低于4.9Pa。2.1.1.3操作间操作间应安装空气除菌过滤层流装置。洁净度不应低于10000级，局部

5、净化度为100级，或放置同等级净化工作台，并准备药物天平，乙醇灯，火柴，乙醇棉，大、小橡皮乳头等。2.1.1.4缓冲间缓冲间内应有洗手盆，无菌衣、帽、口罩、拖鞋等。缓冲间内不应放置培养箱和其他杂物。2.1.1.5洁净级别及检查方法通常采用尘粒数及浮游菌数或沉降菌数测定法。第13页共13页洁净级别尘粒数/m3活微生数（个）/m3≥0.5µm≥5µm100级≤3，500≤0≤510000级别≤350，000≤2000≤100100000级别≤3，500，000≤20，000≤500GB/T16294-1996）。洁净级别个/（∮90㎜.

6、0.5h）100级≤110000级≤3100000级≤102.1.1.5.1浮游菌数测试方法（参照中华人民共和国国家标准GB/T16293-1996）。2.1.1.5.2沉降菌数测定（Ⅱ法）——无菌室操作台消毒擦拭处理后，先启动层流净化装置30min，将备妥的营养琼脂平板3个（经30～35℃预培养48h，证明无菌落生长）。以无菌方式（或经传递箱）移入操作间，置净化台左、中、右各1个，开盖，暴露30min后将盖盖上。在30～35℃培养箱内倒置培养48h，取出检查。3个平板生长的平均菌落数不超过1个。——无菌操作台或净化工作台要定期检测

7、其洁净度，应达到100级。净化工作台中的高效及中效过滤器应根据检测情况，必要时予以更换处理。2.1.1.6消毒处理无菌室应在每次操作前、后均用0.1%苯扎溴铵溶液或其他消毒液擦拭操作台及可能污染的死角。开动层流净化装置，同时用紫外杀菌灯照射30min。2.1.2其他设备净化工作台、恒温培养箱（30～35℃）、生化培养箱（25～28℃），微波炉（或其他适宜加热装置）、康氏振荡器、匀浆仪（3000～8000r/min）、恒温水浴、电热干燥箱（250～300℃）、电冰箱、空调、高压蒸汽灭菌器（使用时应进行灭菌效果检查并应定期请有关部门检定

8、）。第13页共13页2.2仪器及器皿2.2.1菌落计数器、显微镜（1500X）、电子天平或药物天平（感量0.1g），pH系列比色计。2.2.2玻璃器皿锥形瓶（250～300ml，内装玻璃珠若干）、研钵（陶瓷制，直径10～12cm）、培