003微生物限度检查法标准操作规程

《003微生物限度检查法标准操作规程》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、003微生物限度检查法标准操作规程湖北长久瑞华药业有限公司GMP文件编码：SOP-ZL-QT003-001.目的制定微生物限度检查法标准操作规程。2.适川范围适用于微生物限度检查。3.职责QC人员：严格按本S0P进行操作。QC主管：监督检查本SOP执行情况。4.内容细菌、霉菌及酵母菌计数4.1.简述细菌、霉菌、酵母菌计数是检测规定企业单位内的非灭菌制剂污染的活菌数量，是判定药品受到微生物污染程度的重要指标，也是对生产企业的药用原料、辅料、设备器具、T.艺流程、生产环境和操作者的卫生状况进行卫生学评价的综合依据一个细菌、霉菌和酵母菌菌落均可由一个或多个

2、菌细胞生长繁殖形成。因此供试品中所测的菌落数实际为菌落形成单位数(colonyformingunitg,CFU),而不应理解为细菌、霉菌、酵母菌的个数。在进行木法测定时，必须严格按木法所规定的条件操作，以免产生实验误差。4.2.设备、仪器及用具：4.2.1.设备无菌室、净化工作台、生化培养箱(30-35。C)、电热恒温水浴锅、干燥箱、电冰箱、不锈钢双层立式消毒器、紫外灯等。4・2.2・仪器及器血：湖北长久瑞华药业有限公司GMP文件显微镜、电子分析天平、锥形瓶(250-300ml).研钵、培养皿(90mm)、量筒、试管(18X180mm)及塞、吸管、注

3、射器、注射针头、载玻片、盖玻片、玻璃消毒缸等。4.2.3.用具：大、小橡皮乳头，洁净工作服、口罩、医用手套、接种环、酒精灯、酒精棉球、灭菌剪刀、灭菌银了、灭菌钢锥、不锈钢药匙、试管架、火柴、记号笔、白瓷盆、洗手盆、陶瓦盖(12cm)、实验记录纸等。4.3.1.消毒液0.1%苯扎澳桜溶液：供洗手、擦拭操作台面用。75%乙醇溶液4.3.2.稀释剂、试剂及配制：4.3.2.1.0.9%无菌氯化钠溶液:取氯化钠9.0g,加水使溶解成1000ml,121oC灭菌20mino4.3.2.2.1%二盐酸二甲基对苯二胺试液：収二盐酸二甲基对苯二胺0.lg,加水10m

4、l即得。需新鲜少量配制，于冷处避光保存，如试液变成红褐色，不可使用。4.3.2.3.40%氢氧化钾试液:取氢氧化钾40.0g,加水使溶解100ml。4.3.2.4.碘试液:取碘6g与碘化钾5g,加水20ml使溶解,置密闭棕色瓶中储存。4.3.2.5.盐酸试液：取盐酸&4ml,加水使稀释成100mlo4.4.培养基营养琼脂培养基、营养肉汤培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、胆盐乳糖培养基、明胶培养基、PDP琼脂、硝酸盐胎冰培养基、蛋白腺水培养基、枸椽酸盐培养基、磷酸盐葡萄胎冰培养基4.5.操作方法4.5.1.试验前准备4.5.1.1.将供试品及所有已灭菌的平皿

5、、锥形瓶、试管、吸管（lull、10ml）、量筒、稀釋剂等移至传递窗内。每次试验所用物品必须事先计划，准备足够川量，避免操作中出入操作间。4.5.1.2.开启微生物室紫外灯和空调净化系统，并使其工作不低于30mino湖北长久瑞华药业有限公司GMP文件4.5.1.3.关闭紫外灯。QC质检员进一更，用洗手液洗于•，烘干。进入二更，换工作鞋,再用0.1%苯扎漠镀溶液洗手，穿戴洁净无菌服、帽。4.5.1.4.操作间先用酒精棉球擦手，再用乙醇擦拭供试品瓶、盒、袋等的开口处周围，待干后用灭菌的手术银或剪将供试品启封。4.5.2.1.固体供试品称取供试品10g（或

6、液体适量），置于匀浆杯或适当灭菌容器屮，加入lOOmlO.9%无菌氯化钠溶液，用匀浆仪（3000〜5000r/2〜4min）,振荡器或乳钵研磨等方法分散混匀，胃溶胶囊加稀禅剂后置45°C±1°C水浴中振摇，肠溶胶囊加无菌-磷酸盐缓冲液后先打碎再置45°C±1°C水浴振摇溶解。4.5.3.细菌数测定4.5.3.1.供试液的稀禅4.5.3.1.1.取2-3支灭菌试管，分别加入9ml灭菌稀释剂（此时操作一般为：左手执试管并将塞打开、倾斜，右手执10ml吸管吸量，注意：勿在乙醇灯焰峰正上方操作，以免灯焰将供试液中菌细胞杀灭）。加完稀释剂后，试管塞应立即塞上。

7、4.5.3.1.2.另取1支lml灭菌吸管吸取1：10均匀供试液lml,加入装有9ml0.9%无菌氯化钠溶液的试管中混匀，即为1：100供试液。以另一支1皿吸管，按上述操作，作1000的稀释。4.5.3.2.注平皿在进行10倍（或100倍）递增稀释的同时，以该稀禅级吸管，吸取每级稀释液各1ml置每个灭菌平川I•中，每一稀释级注2〜3个平川I.（此时，一般为左手执平JIIL,将盖半开，右手执吸管），注平皿时，将lml供试液慢慢全部注入平皿中，管内无残留液体，防止反流至吸管尖端部。取1支lml吸管吸取0.9%无菌氯化钠溶液lml注入2个平血中，作为阴性对

8、照。4.5.3.3.倾注培养基4.5.3.3.1.将预先配制好的培养基（细菌计数用营养琼脂，霉菌、酵母菌用玫