003_微生物限度检查法标准操作规程

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1、湖北长久瑞华药业有限公GMP文件编码：S0P-ZL-QT003-00题目微生物限度检查法标准操作规程份数2份起草人审核人QA审核批准人生效日期起草原因年月日新订■年月曰年月曰年月曰年月口修订口编制部门质量保证部颁发部门办公室分发部门办公室、质量保证部4.冃的制沱微生物限度检查法标准操作规程。5.适用范围适用于微生物限度检查。6.职责QC人员：严格按本SOP进行操作。QC主管：监督检查本SOP执行情况。7.内容细菌、霉菌及酵母菌计数4.1•简述细菌、霉菌、酵母菌计数是检测规定企业单位内的非灭菌制剂污染的活菌数量,是判定药品受到微生物污染程度的匣要指标，也是对

2、生产企业的药用原料、辅料、设备器具、工艺流程、生产环境和操作者的卫生状况进行卫生学评价的综合依据之O一个细菌、霉菌和酵母菌菌落均可由一个或多个菌细胞生长繁殖形成。因此供试品中所测的菌落数实际为菌落形成单位数(colonyformingunitg,CFU),而不应理解为细菌、霉菌、酵母菌的个数。在进行本法测定时，必须严格按本法所规定的条件操作，以免产生实验误差。4.2•设备、仪器及用具：设备无菌室、净化工作台、生化培养箱(30-35。C)、电热恒温水浴锅、干燥箱、电冰箱、不锈钢双层立式消毒器、紫外灯等。仪器及器皿：显微镜、电子分析天平、锥形瓶（250-300

3、ml）、研钵、培养皿（90mm）、量筒、试管（18X180mm）及塞、吸管、注射器、注射针头、载玻片、盖玻片、玻璃消毒缸7.5.2.3.用具：大、小橡皮乳头，洁净工作服、口罩、医用手套、接种环、酒精灯酒精棉球、灭菌剪刀、灭菌银子、灭菌钢锥、不锈钢药匙、试管架、火柴、记号笔、白瓷盆、洗手盆、陶瓦盖（12cm）、实验记录纸等。5.试液4.3.1.消毒液0.1%苯扎澳镀溶液：供洗手、擦拭操作台面用。75%乙醇溶液4.稀释剂、试剂及配制：1.0.9%无菌氯化钠溶液：取氯化钠9・0g,加水使溶解成1000ml,121"C灭菌20mino3.2.2.1%二盐酸二甲基

4、对苯二胺试液：取二盐酸二甲基对苯二胺0.lg,力MC10ml即得。需新鲜少量配制，于冷处避光保存，如试液变成红褐色，不可使用。4.3.2.3.40%氢氧化钾试液:取氢氧化钾40.0g,加水使溶解100mlo4.3.2.4.碘试液：取碘6g与碘化钾5g,加水20ml使溶解，置密闭棕色瓶中储存。3.2.5.盐酸试液:取盐酸8.4ml,加水使稀释成100mlo培养基营养琼脂培养基、营养肉汤培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、胆盐乳糖培养基、明胶培养基、PDP琼脂、硝酸盐月东水培养基、蛋白月东水培养基、枸椽酸盐培养基、磷酸盐葡萄月东水培养基5.操作方法4.3.2.5.1.

5、试验前准备4.5.1.1.将供试品及所有已灭菌的平皿、锥形瓶、试管、吸管（1ml、10ml）、量筒、稀释剂等移至传递窗内。每次试验所用物品必须事先计划，准备足够用量，避免操作中出入操作间。4.5.1.2.开启微生物室紫外灯和空调净化系统，并使其T作不低于30mino4.5.1.3.关闭紫外灯。QC质检员进一更，用洗手液洗手，烘干。进入二更，换工作鞋，再用0.1%苯扎溟钱溶液洗手，穿戴洁净无菌服、帽。5.1.4.操作间先用洒精棉球擦手，再用乙醇擦拭供试品瓶、盒、袋等的开口处周围，待干后用灭菌的手术铁或剪将供试品启封。4.供试液的制备5.6.6.1.固体供试品

6、称取供试品10g（或液体适量），置于匀浆杯或适当灭菌容器屮，加入lOOmlO.9%无菌氯化钠溶液，用匀浆仪（3000〜5000r/2〜4min）,振荡器或乳钵研磨等方法分散混匀，胃溶胶囊加稀释剂后置45°c±rc水浴中振摇，肠溶胶囊加无菌磷酸盐缓冲液后先打碎再置45°C土1°C水浴振摇溶解。5.6.2.5.3.细菌数测定5.6.7.1.供试液的稀释4..5.3.1.1.取2-3支灭菌试管，分别加入9ml灭菌稀释剂（此吋操作一般为：左手执试管并将塞打开、倾斜，右手执10ml吸管吸量，注意：勿在乙醇灯焰峰正上方操作，以免灯焰将供试液中菌细胞杀灭）。加完稀释剂后

7、，试管塞应立即塞上。5.1.2.另取1支lml灭菌吸管吸取1：10均匀供试液1ml,加入装有9ml0.9%无菌氯化钠溶液的试管屮混匀，即为1：100供试液。以另一支linl吸管，按上述操作，作1：1000的稀释。4.5.3.2.注平皿在进行10倍（或100倍）递增稀释的同时，以该稀释级吸管，吸取每级稀释液各linl置每个灭菌平皿中，每一稀释级注2〜3个平皿（此时，一般为左手执平皿，将盖半开，右手执吸管），注平1111时，将lml供试液慢慢全部注入平皿中，管内无残留液体，防止反流至吸管尖端部。取1支1ml吸管吸取0.9%无菌氯化钠溶液lml注入2个平JHL中

8、，作为阴性对照。5.3.3.倾注培养基5.3.3.1.将预先配制好