（中文）共表达自杀基因联合多细胞因子基因的膀胱肿瘤特异性真核表达载体的构建和鉴定论文

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1、空15》攻研究生学位论文共表达自杀基因联合多细胞因子基因的膀胱论文题目（中文）肿瘤特异性真核表达载体的构建和鉴定ConstructionandIdentificationofTissue论文题目（夕卜文）SpecificEukaryoticExpressionVectorforSuicideGeneCombinedwithCytokineGene研究生姓名邹源学科、专业外科学•泌尿外科学研究方向泌尿系肿瘤学位级别硕士导师姓名、职称田俊强副主任医师论文工作起止年月2011年7月至2013年1月论文提交日期2013年3月论文答辩日期

2、2013年5月学位授予日期2013年6月校址：甘肃省兰州市原创性声明木人郑重芦明：木人所呈交的学位论文，是在导师的指导下独立进行研究所取得的成果。学位论文中凡引用他人已经发表或未发表的成果、数据、观点等,均已明确注明出处。除文屮已经注明引用的内容外，不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究成果做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。木芦明的法律责任由木人承担。论文作者签名：□期：关于学位论文使用授权的声明本人在导师指导下所完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属兰州大学。木人完全了解兰州大学有

3、关保存、使用学位论文的规定，同意学校保存或向国家有关部门或机构送交论文的纸质版和电了版，允许论文被杳阅和借阅；木人授权兰州大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用任何复制手段保存和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该论文宜接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为兰州大学。木学位论文研究内容：□可以公开□不宜公开，已在学位办公室办理保密中请，解密后适用本授权卩。（请在以上选项内选择其中一项打“V”）论文作者签名：导师签名：F1期：FI期：英文缩写索引缩略词英文全称中文全称UPIIUro

4、plakinII尿路斑块蛋1112HSV-TKHerpessimplexvirusthymidinekinase单纯疱疹病毒胸腺激酶基因IL-2interleukin-2白细胞介素2TNF-atumornecrosisfactoralpha肿瘤坏死因子0TRAILTumorNecrosisFactor-relatedApoptosis-inducing刖嘯坏死因子相关凋亡诱导配体PCRPolymeraseChainReaction聚合酶链式反应技术GCVGanciclovir更昔洛韦TCRFTcellgrowthfactorT细

5、胞生长因了DRdeathreceptor死亡受体DISCdeath-inducingsignalcomplex死亡诱导信号复合物DCdendriticcells树突细胞MSCMesenchymalstemcells间质干细胞SOEsplicingbyoverlapextension重證延伸拼接技术CTLcytotoxictlymphocyte细胞毒性T淋巴细胞共表达自杀基因联合多细胞因子基因的膀胱肿瘤特异性真核表达载体构建及鉴定中文摘要目的：构建五种具冇膀胱肿瘤特异性的双启动子重组真核表达载体，每种载体皆包含尿路斑块蛋口2(Ur

6、oplakinII,UPII)启动子控制的单纯疱疹病毒胸腺激酶基因(herpessimplexvimsthymidinekinase,HSV-TK)>并分别搭配人白细胞介索2(interleukin-2,IL-2)肿瘤坏死因子a(tumornecrosisfactoralpha,TNF-a)、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TumorNecrosisFactor-relatedApoptosis-inducing,TRAIL)、融合基因IL-2-TNF-a.融合基因IL-2-TRAILo方法：以实验室保存的各种质粒为模板通过常规聚

7、合酶链式反应技术(PolymeraseChainReaction,PCR)分别扩增出UPII启动子及HSV-TK基因、IL-2基因、TNFv基因、TRAIL基因。用重叠延伸拼接技术将IL-2分别与TNF-a>TRAIL融合为融合基因IL-2-TNF-a(IT)、IL-2-TRAIL(ITR)。以上PCR所得各基因片段分别连接到真核载体pMDIS-T并转化至感受态细胞TOP1OF中，摇菌并提取质粒。质粒经PCR和酶切鉴定为阳性后进行测序，测序结果与基因序列同源比较，选取正确的质粒进行载体的构建。用分子生物学技术将双启动子真核表达载

8、体pBudCE4」的EF-la启动子替换为UPII启动子形成重组载体pBud-UPII/CMV,转化至TOP1OF后摇菌并提取质粒进行鉴定，鉴定表明替换成功后在UPII后克隆入TK基因形成新载体pBud-UPII-TK/CMV并鉴定。选取鉴定结果为阳性的质粒并在