细菌内毒素检查法培训---新乡市药检所肖健

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1、中国药典2010年版细菌内毒素检查法新乡市食品药品药品检验所肖健简况历史回顾与发展趋势细菌内毒素鲎试剂检测内毒素的机理2010年版药典细菌内毒素检查法介绍一、简况一百多年前，在西方医学发展史上，一个最重要的发展就是注射给药（特别是静脉注射）方式的创立。毫无疑问它在人类与疾病作斗争的过程中起了重要作用，但是无论过去还是现在，临床上使用注射剂时经常出现注射引起的发热、头痛、恶心、肤色灰白、昏迷等，甚至导致患者死亡，这些反应总称为不良反应。不良反应可分为热原反应和过敏反应。因此，注射剂的热原检查是保证药

2、品安全的重要检验项目之一。1912年第一次考虑用家兔做热原试验，1942年美国首先将家兔热原检查方法收入药典。中国药典于1953年开始收载。因此，半个世纪以来，家兔法对保证药品临床使用的安全发挥了重要的作用。但是，随着科学技术和制药工业的发展，这一检查法的局限性越来越明显，所以用新的检验方法代替家兔法检测热原早已成为国内外医药界科研、生产、临床检验等部门很紧迫的问题，基于科学实践发展的要求从而发现并建立了细菌内毒素检查方法。细菌内毒素试验方法有：凝胶法（Gelationassay）属限量；浊度法（

3、Turbidimetrecassay）属定量；显色底物法（Chromogenicassay）属定量法；免疫方法（Immumologyassay）等。历史回顾和发展趋势1、历史回顾美国是发明鲎试剂和最先建立鲎试验方法的国家。1956年，美国动物学家F.Bang发表论文《鲎的一种细菌性疾病》，阐述了细菌内毒素使鲎血凝固的现象。1964年，F.Bang和J.levin提出了鲎血凝集的初步机理。1968年，F.Bang和J.levin建立了鲎试验的方法。1973年，美国食品药物管理局（FDA）承认鲎试剂为

4、一种生物制品。1980年，FDA制定了用鲎试剂检查人用和兽用注射药内毒素的准则；美国药典20版（USPXX）收载细菌内毒素检查法（BET），但在药典各品种正文中未涉及。1983年，USPXX版第四增补本规定了注射用水等5种常用药品和40种放射性药品用细菌内毒素检查取代热原检查。1991年，USPXXⅡ版第五增补本规定185种药品以细菌内毒素检查取代热原检查。1995年，USPXXⅢ版规定471种药品用细菌内毒素检查法检查，保留热原检查的药品不足30种。1999年，USPXXⅣ版规定670种药品用细

5、菌内毒素检查法检查，保留热原检查的药品约20种。2000年，国际调和委员会使美国药典（USP）、欧洲药典（EP）和日本药局方（JP）达成《BET的国际调和案》，统一的BET已收载于USPXXⅣ和NF19的第二增补本中，并于2001年1月1日生效。英国、欧洲药典以及日本药局方都已收载细菌内毒素检查法，但规定检查的品种各有不同。一个共同的特点是注射水是最先被允许检查的品种。中国目前是世界上鲎试剂产量最大的国家之一。1975～1982年是我国鲎试剂的研制阶段，当时由于缺乏标准化研究的基础，上千批次的实验

6、结果难于分析。1983年，卫生部授权国家药品生物制品检定所组织全国范围的大输液及放射性药品鲎试验的协作研究。1988年，卫生部颁布细菌内毒素检查法，允许4种药品使用细菌内毒素检查法初检。1993年，中国药典1990年版第二增补本收载细菌内毒素检查法，但未涉及任何品种正文。1995年，“中国药典细菌内毒素检查法实施会议纪要”提出争取在3～5内我国上百种药品由热原检查法改为细菌内毒素检查法。1996年，中国药典1995年版二部附录收载经修订的细菌内的毒素检查法，注射用水等五种常用药品和九种放射性药品正

7、文规定了细菌内毒素检查，取消了热原检查（其中5%及10%葡萄糖注射液是后来发通知补充）。1998年，中国药典1995年版1998年增补本收载经重大修订的细菌内毒素检查法，其中对鲎试剂和细菌内毒素检查用水的质量以及细菌内毒素检查方法提出了更高要求。2000年，中国药典2000年版（二部）新增细菌内毒素检查品种57种，且收载了《细菌内毒素检查法应用指导原则》。2005年，中国药典2005年版（二部）新增细菌内毒素检查品种约200种。2、发展趋势A.各国药典收载细菌内毒素检查法成为发展的趋势细菌内毒素检

8、查法作为一种新技术载入药典，成为官方承认的一种法定的药检方法，反映了药典标准水平、药检技术水平的提高，标志着一个国家制药工业水平及药品质量的提高。随着时间的推移，必将有更多国家的药典收载细菌内毒素检查法。B.细菌内毒素检查取代热原检查成为必然的趋势细菌内毒素检查法所具有的优点表明它比热原检查法更适应现代制药工业的发展。从USPXX版开始收载细菌内毒素检查法，到USPXXⅢ版已有超过90%的注射剂品种规定内毒素检查。其它国家的药典规定细菌内毒素检查的品种同样经历了从无到有，从少到多的