【精品ppt】细菌内毒素检查法

《【精品ppt】细菌内毒素检查法》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、细菌内毒素检查法《中国药典》2010年版培训班山东省药品检验所2010.10主要内容细菌内毒素检查相关理论及概念《中国药典》2010年版增修订情况细菌内毒素检查法及注意事项细菌内毒素检查相关理论及概念细菌内毒素鲎试剂鲎试剂与内毒素的反应机理细菌内毒素检查名词解释细菌内毒素检查法（BacterialEndotoxinstest）热原检查法（Pyrogentest）LAL(Limulusamebocytelysate)TestTAL(Tachypleusamebocytelysate)TestLimulusTest

2、细菌内毒素的发现细菌内毒素这个概念在1890年的时候就已被提了出来，它是在研究发热物质过程所引成的，1933年Boivin最先由小鼠伤寒杆菌提取出来，进行化学免疫学方面的研究，到1940年时候，Morgan使用志贺氏痢疾菌阐明了细菌内毒素是由多糖脂质及蛋白质三部分所组成的复合体，到了1950年以后，随着生物学，物理化学，免疫学以及遗传学等的进步发展，细菌内毒素的研究工作，尤其是其化学结构组成及各种生物活性间的关系也更加明确起来。Boivin：Morgan：内毒素是由多糖、脂质和蛋白质组成的复合体。脂多糖又由化学

3、和生物性质不同的特异O抗原、核心多糖和类脂A（脂质A）组成。内毒素的多糖结构细菌内毒素参考品的建立不同细菌的内毒素对于鲎试剂的反应活性不同，为保证鲎实验法的平行性和重复性，要建立一种内毒素的标准物质作为实验中的控制标准。由于大肠杆菌内毒素在天然内毒素中的致热活性比较高，在各种细菌内毒素对鲎试剂反应的灵敏性上处于中值的位置，且其稳定、可溶，因此一般都采用大肠杆菌的内毒素作为标准内毒素参考品。标准内毒素与环境内毒素标准内毒素：指经人工提取精制并经生物效价测定的细菌内毒素，作为细菌内毒素检查的参考品。国际标准品（IS

4、）参考标准品（RSE）国家标准品（NS/RSE）标准内毒素工作标准品（CSE）80年代以前以重量作为内毒素的单位1982年USP20引入以生物效价为量值的内毒素单位（EU，EndotoxinUnit）细菌内毒素的量值CP2010年版规定内毒素标准品溶解后要在旋涡混合器上混合15分钟，以后的每一步稀释前要至少混合30秒，其他国家药典也有类似要求；具有两极活性的内毒素分子在水中呈现不均匀分布不按要求进行旋涡混合会使所稀释的内毒素效价偏低，造成灵敏度标示偏高、阳性对照不凝等不正确的实验结果细菌内毒素标准品的稀释鲎是一

5、种海洋无脊椎动物，蓝色的血液。种类以及分布：美洲鲎：北美洲东岸海域中国鲎：中国东南沿海南方鲎：泰国和马来群岛海域圆尾鲎：东南亚西部海域世界上现存鲎的种类鲎试验的发现1956年JohnsHophins大学动物学家Frederik.Bang发现革兰阴性细菌的粗制品能使鲎的血细胞凝聚。1963～1964年Jack.Levin和Bang对细菌引起鲎血凝聚进行研究，用内毒素和鲎血细胞溶解物证明鲎血凝聚机制是一种酶反应。多位学者对鲎血细胞溶解物（LAL）进行研究，阐释了凝聚机制鲎试剂：鲎血液变形细胞裂解物冷冻干燥制备而成鲎

6、试剂的种类：依据鲎的种类分：美洲鲎试剂（LAL）中国鲎试剂（TAL）圆尾鲎试剂（CAL）依据检查方法分：凝胶法鲎试剂和定量法鲎试剂依据内毒素和鲎试剂反应的专一程度分：普通鲎试剂和特异性鲎试剂鲎试剂与分类C因子活化的C因子内毒素活化的B因子B因子凝固酶凝固酶原凝固蛋白（凝胶）凝固蛋白原β(1,3)-D-葡聚糖或LAL-RM活化的G因子（旁路反应）G因子二价阳离子凝胶法鲎试剂与内毒素的反应机理——复杂的酶促反应过程BET的目的和前提确保药品不含有能导致患者发热反应发生的足量的细菌内毒素。一定量的细菌内毒素可以被人体

7、耐受，也是SFDA允许的。前提是假定引起发热反应的热原几乎全部是内毒素。二、2010年版《中国药典》细菌内毒素检查法增修订情况2010版与2005版区别修订背景注射用药品、生物制品建立细菌内毒素检查法指导原则2010版与2005版区别2010版2005年版1、细菌内毒素检查用水系指内毒素含量小于0.015EU/ml（用于凝胶法）或0.005EU/ml（用于光度测定法）且对内毒素试验无干扰作用的灭菌注射用水凝胶法细菌内毒素检查用水系指内毒素含量小于0.015EU/ml的灭菌注射用水。光度测定法用的细菌内毒素检查用

8、水，其内毒素的含量应小于0.005EU/ml2、本试验操作过程应防止微生物和内毒素的污染试验操作过程应防止微生物的污染2010版2005年版3、1EU与1个内毒素国际单位（IU）相当----4、常用干热灭菌法（250℃、30分钟以上）去除常用的方法是在250℃干烤至少60分钟5、删除对于过酸、过碱或本身有缓冲能力的供试品，需调节被测溶液（或其稀释液）的pH值，可使用酸、碱溶液或鲎试剂生