细菌内毒素检查法.ppt

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1、细菌内毒素检查法王思理2000版较95版药典修改要点新增加三个定义1.细菌内毒素检查用水2.鲎试剂灵敏度3.反应终点浓度其他增加内容前言：细菌内毒素国家标准品的用途增加了复核鲎试剂灵敏度。试验准备：增加了试验所和器皿应确证无干扰细菌内毒素的检查。鲎试剂灵敏度复核:增加了2管阴性对照。供试品干扰试验:增加了标准对照检查法:鲎试剂的支数由原来4支增加为5支结果判断:细菌内毒素检查法应用指导原则1.细菌内毒素限值的确定：L=K/M2.干扰实验3.标准物质4.鲎试剂5.细菌内毒素检查用水细菌内毒素定量测定法（比浊

2、法和显色基质法）1.标准物质2.细菌内毒素检查用水3.鲎试剂：应符合定量测定要求。4.实验准备：同细菌内毒素检查法。细菌内毒素定量实验方法1.标准曲线的可靠性实验:r<-0.982.供试品的干扰实验:MVD=L.C/λ13.测定及判断:回收率50%-200%4.供试品的定量测定：测定结果与L比较细菌内毒素检查法应用指导原则的指导意义1.明确指明了制订指导原则的目的是“为了将细菌内毒素检查法广泛应用于药品、生物制品的质量控制”讲的非常明确。2.首次从官方文件中肯定了细菌内毒素定量测定法，这对促进“定量法”在我

3、国应用将起重大的促进作用。细菌内毒素检查法应用指导原则的指导意义3.指导原则对细菌内素限值作出了非常明确的规定：1、细菌内毒素限值的确定药品、生物制品的细菌内毒素限值(L)一般按以下公式确定：L=K/M4.在这次指导原则中只字未提热源与细菌内毒素两法改变中的对比试验，即今后在两法改换中不必再做对比试验。这样必将大大加速我国两法的改换进程。细菌内毒素检查法应用指导原则的指导意义5.指导原则中明确规定：“标准物质试验中所用细菌内毒素标准物质应使用由中国药品生物制品检定所研制、标定和分发的细菌内毒素国家标准品和工

4、作标准品。”6.随着定量法在我国得到肯定、应用和推广，它还将有力地推动促进细菌内毒素检查法在我国的新进展。细菌内毒素国家标准品981的研制概况1.我国细菌内毒素国家标准品从1979年研制成功并正式建立至今共研制分发了六批。2.现行细菌内毒素国家标准品981的研制与考核时间3.研制分四个阶段细菌内毒素国家标准品981的特点1.细菌内毒素精品的提取2.细菌内毒素国家标准品的赋形剂3.候选品的生产4.候选品的考核5.协作标定---新的国际标准品IS2为基准细菌内毒素国家标准品981的特点6.标定方法---凝胶法和

5、定量法7.协作标定后结果经数据处理和专家讨论8.报中检所学术委员会审定9.长期稳定性考核与分装后的稳定性考核10.标准品的有效期细菌内毒素检查法考察报告1.王思理等一行4人于1998年1月16日-27日首次赴美国进行细菌内毒素检查法的专题考察。2.我们这次考察作了充分准备,是带着问题而去的,在出访前又集中讨论了要了解的重点问题.3.这次考察将对我国细菌内毒素检查法的发展起到良好的作用.考察主要收获一.鲎试剂的生产与管理1.鲎试剂生产企业生产的试剂均须按照美国联邦法律的有关规定进行质量控制并送FDA检验通过

6、后方可销售。2.生产企业在批批送检时须呈交所有质量控制和原始记录。3.在对鲎试剂的灵敏度进行标定时需同进使用美国内毒素国家标准品和鲎试剂参考标准品。考察主要收获二.内毒素标准品的管理1.美国FDA负责管理内毒素国家标准品(EC系列)和鲎试剂参考品,政府免费提供内毒素国家标准品和鲎试剂参考品给鲎试剂生产厂家用于灵敏度标定。2.工作标准品(CSE)由厂家自行生产和发放,政府不核发有关执照。考察主要收获三.细菌内毒素检查法用于药品生产过程及最终产品的质量控制考察主要收获四.由热原检查法改为细菌内毒素检查法1.细

7、菌内毒素限值的计算2.由热原检查法转换为细菌内毒素检查法的条件是供试品在一定条件下不干扰鲎试验，每个厂家每个品种做3批供试品的干扰试验即可，不必进行对比试验。考察主要收获五.细菌内毒素检查法1.鲎试剂灵敏度复核的目的不是考察灵敏度是否准确，而且考察操作是否准确，以及工作标准品是否准确。2.0.1ml规格的鲎试剂的生产与使用应与国际接轨。3.对供试品进行常规检查时，阳性对照对4个浓度，至少有两个浓度，即2λ和0.25λ。同时供试品阳性对照不可缺少。每个浓度平等做两管。4.．用于配制调节供试品酸碱度的氢氧化钠溶

8、液、盐酸溶液、缓冲溶液等均严格要求细菌内毒素检查用水。考察主要收获六.其他1．在计算大输液的内毒素限值时，M一般定为10ml/kg/hr。2.FDA的关于细菌内毒素检查法的Guldeline(指南)不具有法律效应，它不是Regulation。3.美国药典收裁的细菌内毒素检查法的法定方法为凝胶法，其它两种方法可以采用，但需做比较试验。4.新药在生产过程中和最终产品的质量控制均须要求采用细菌内毒素检查法。几点建议1.