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《小鼠PGC-1a基因启动子转录调控体系载体的构建及活性鉴定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、小鼠PGC-la基因启动子转录调控体系载体的构建及活性鉴定冉莉I,涂晶2,杨靖I,钟警2,洪涛I,文格波2(1•南华大学附属第一医院内分泌科，湖南衡阳，421001；2.南华大学附属第一医院临床研究所，湖南衡阳，421001)摘要：目的：克隆小鼠PGC-la基因的启动子并分析莫转录调控模式。方法：设计引物，以小鼠肝脏组织DNA为模板，PCR扩增小鼠PGC-la基因启动了区并克隆入荧光素嗨报告基因表达载体pGL3-Basic中，构建具有PGC-la基因启动子区转录活性的报告质粒PGL3-PGC-Ia-Luco在此基础上，通过设计特异
2、性引物，引入替换碱皋突变相关转录因子调控模序，构建点突变融合载体。报告质粒与内参质粒共转染lclc7及c2cl2细胞系，48h后收获细胞检测荧光索酶的表达情况。结果：构建的pGL3-PGC-la-Luc系列报告质粒经过酶切鉴定及DNA测序分析都显示止确；转染2种细胞系后进行荧光素陋活性检测的结果表明，PGC-la基因启动子区域(・2533・+78)具有较强的转录活性；突变失活PGC-la基因启动子区域中的CRE反应原件导致转录活性明显降低。结论：成功构建小鼠PGC-la基因启动子报告质粒，证实PGC-la基因上游区域(・2533・
3、+78)具有较强的启动子活性；启动子区域中的CRE和IRE反应原件为主要转录调控位点。关键词：细胞生物学；PGC-la；启动了；转录调控中图分类号：Q291CloningandAnalyzingthePromoterofMousePGC-laGeneRANLii,TUJing2,YANGJingi,ZHONGJing2?HONGTaoi,WENGeboz(1.Departmentofendocrinology,TheFirstAffiliatedHospitalofUniversityofSouthChina,Hengyang,H
4、unan,421001;2.Clinicalresearchinstitute,theFirstAffiliatedHospitalofUniversityofSouthChina,Hengyang,Hunan,421001)Abstract:Inthispaper,weclonedmousePGC-1apromotor(-2533・+78)andconstructedthepGL3-PGC-1a-Lucreportervectoranditsmutants.Thetranscriptionactivitywasanalyzedb
5、yLuciferaseassay.PCRwasusedtoobtainDNAfragmentsthatcontainthepromoterofPGC-lagenebyusinggenomeDNApreparedfrommouseliverasthetemplates.ReporterplasmidspGL3-PGC-1a-Lucwhichcontainwild-typeormutant-typepromoterwereconstructcd.AfterthereporterplasmidsweretransicnUytransfe
6、ctedintolclc7andc2cl2cells,theLuciferaseactivityweretested.ResultshowedthatmousePGC-lapromotorfragmentswerecorrectlyamplifiedandthereporterplasmidsweresuccessfullyconstructed；Luciferaseassaysoftheconstructedreporterplasmidsintwocelllinesshowedthatthepromoterregion(・25
7、33-+7S)hadtranscriptionalactivity,theCREandIREsitesweremajortranscriptionalregulatoryregionsinthepromoter.Keywords:cellbiology;PGC-la;promotor;transcriptionalregulation0引言过氧化物酶体增生物激活受体辅激活了•・la(PGC-la)是线粒体和关基因的转录辅基金项目：教育部高等学校博士学科点专项科研基金(20094324110001)作者简介：
8、1]•莉(1982-)
9、,女，硕士，主治医师，主要研究方向：2型糖尿病发病机理通信联系人：文格波(1957-),男，教授，廨士生导师，主婆研究方向：2型糖尿病的发病机理.E-mail:gb_wen@yahoo.com.cn激活因了，最早作为调控脂肪细胞分化的核受体PPAR
