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时间:2019-02-02
《斑马鱼生长抑素转基因载体构建及启动子活性分析》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、本学位论文作者完全了解西南大学有关保留、使用学位论文的规定,有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。本人授权西南大学研究生院(筹)可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书,本论文:口不保密,昧密期限至年月止)。学位论文作者签名:酬\生杉导师签名:转签字日期:例7年易月歹日签字日期:如‘/年易月罗日本论文由国家重大科学研究计划项目(973):“调控内胚层组织器官发育的分子机制"(2009CB941200)资助3.2实
2、验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯313.3P1一P5质粒在HepG2细胞中的活性检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一343.4实验结果与分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯353.5.结果与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.4l结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯45参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯47致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯
3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..59攻读硕士学位期间发表论文及参与科研项目⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.61m√皿Jo以_J加“∞舶凹加●■●■●■●.¨.¨●■●■●■●■●■●■●■●■●■●■●■●缩写用下,EGFP绿色荧光在斑马鱼胚胎中呈现全身性表达;挑选了24hpf发荧光的胚胎对数据进行统计分析发现:乃忍mRNA与质粒共注射的斑马鱼胚胎中绿色荧光约占56.79%左右,而只注射重组质粒的胚胎这一效率有大约27.45%;只注射质粒的对照组胚胎EGFP的表达模式为嵌合型表达,而共注射组则更倾向于片状或带状表
4、达;3dpf时质粒对照组和共注射组荧光胚胎占分别占5.54%和34.08%,这说明共注射组表达更稳定。生长抑素4主要在内分泌胰脏以及胚胎早期发育过程中的底板中表达。借助于生物信息学软件分析斑马鱼ss4翻译起始位点上游2467bp的核苷酸序列中对其表达调控起作用的潜在顺式作用元件。我们发现在斑马鱼ss4可能参与肝胰脏发育、心血管形成等生命过程。我们克隆了这段区域并将其分为长度大小不等的五段分别亚克隆到pGL3.basicvector中,然后将其转染HepG2细胞,利用Promega双荧光报告检测试剂盒来检测不同启动子活性的强弱。以翻译起始位点A+lTG为
5、参照,我们发现翻译起始位点上游.2200bp左右处存在核心启动子,上游.1000bp至.2000bp范围内可能存在对其活性有抑制作用的元件,在上游.500bp处可能存在起促进作用的元件。关键词:生长抑素;斑马鱼;转座子;启动子活性分析两南大学硕上学位论文differentgenesalongwiththevarifiedsomatostatinreceptorsallowsomatostatintopossessalargerangeoffunctions.Thezebrafishsslisexpressedinboththecentralnervou
6、ssystemandthepancreas.BasedOiltheTo/2transposonfoundinmedaka,arecombinantplasmidWasconstructedbyGatewaytechnologywhichcontainsanubiquitouspromoter,ORFofssl,EGFPfluorescentreportergeneandalongterminalrepeatsrecognizedbYTo/2transponase.Weco-injectedtheplasmid(100ng/ui)andinvitrotr
7、anscriptedTo/2mRNA(100ng/u1)ataratioof1;1intotheplasmaofone-twocellstagesembryosandthecontrastWasonlyinjectedplasmaid(50ng/u1)andanalysethetransientexpressionpaaem.WefoundthatCMV/SP6ubiquitiouspromoterCanproduceembryoswithEGFPsystemicexpression.24hourpostfertilizationembryoswere
8、pickedupandusedtoanalyzethetransgenicefficiency
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