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《鹿源牛病毒性腹泻病毒jz054株的分型鉴定（可编辑）》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、畜牧与兽医年第卷第期鹿源牛病毒性腹泻病毒?株的分型鉴定李海涛，苗利光,刘艳环，朱言柱,安亚雄，王坤中国农业科学院特产研究所，吉林长春摘要:为研究牛病毒性腹泻病毒?毒株纶物型、基因型及遗传背景,本研究将其在细胞上进行传代培养并观察细胞培养特性，利用荧光抗体染色和？的方法对其进行基因型鉴定研究。试验结果证明,/?毒株为生物型、基因型。关键词:牛病毒性腹泻病毒;生物型;基因型中图分类号:•文献标志码：文章编号:？•方法牛病毒性腹泻病毒，••荧光抗体鉴定为黄病毒科瘟病毒属的代表种。是牛/将/?病毒液接种单层细胞病毒性腹泻/黏膜病,/的病原体-O可感染牛、孔板
2、，加入%标准胎牛血清的细胞培养维持液，培养〜。按照直接荧光抗体羊、猪和鹿，临床表现为发热、黏膜溃疡、持续性感检测使用说明书操作，荧光显微镜下观察染、腹泻和生殖障碍等。本研究将已分离到的鹿源/?株，利结果。设立细胞阴性对照。..生物型鉴定用在细胞上进行传代培养并观察细胞培养特性、荧光抗体染色和？的方法对其进行了生将保存在一°C的/?病毒培养液室物型和基因型分型鉴定研究，为了解/?温融化，接种于单层细胞，、％:吸株的基因遗传背景、全基因组测序、疫苗毒株驯化研附后弃去液体，加人%标准胎牛血清的究奠定基础。细胞培养维持液,°C、％:培养，并观察细胞的生长情况
3、。材料与方法••?基因分型鉴定•材料病毒接种培养时弃去上清液，每贴壁..病毒与细胞细胞加,按照公司试剂/?株市中国农业科学院特产研究所使用说明书提取总。苗利光博士等分离保存;一型标准株・使用说明按照株、一型标准株'毒株由中书流程，用随机引物合成/?病毒毒株国农业科学院特产研究所苗利光博士制备保存;病毒O合成反应恤体系：提取的总培养用细胞购自中国兽医药品监察所菌种保，斗/斗随机弓物，斗藏中心。处理水，°C,/,仙・・试剂冰浴；灿，/细胞培养基购口；标准胎，“./,斗/斗牛血清购白天津澈洋生物制品科技有限公司；购自.、删？°C合成，°C灭活。;其他常规试
4、剂均为进口或国产分析纯。根据基因组'一区差异,分别设计分型鉴定引物对表。以一型株、一型标准株'毒标准株收稿日期:？？;修冋口期:？？株作对照，作空白对照旧。反应条基金项目：吉林省科技发展计划件:。c；°c,°c,,作者简介:李海涛一，男，硕士研究生，助理研究员个循环；°C表。产物在・％通信作者:苗利光，副研究员，研究方向是动物病原生物学和琼脂糖凝胶上电泳检查结果。分子免疫学,？:.万方数据・・&表分型鉴定引物表反应体系细胞，并在细胞质内合成特异性抗原。组分体积/“却/“■II含上游引物O下游引物无菌水•感染/?细胞；•细胞结果图直接荧光抗体鉴定•荧光
5、抗体鉴定・生物型鉴定用直接荧光抗体检测接种/?细胞接种/?后,？内具毒株的细胞，并以细胞作对照。结果有明显的细胞病变现象，结果见图。结果显示显示接种/?病毒液的细胞在细胞/?是株典型的生物型毒株。如图质有强烈的荧光信号，而正常细胞没有荧光所示:第天吋形成空泡、细胞发生融合，信号产生图。说明/—毒株侵染了O第天大部分细胞凋亡并脱落隧上一出。三卷遂蔓澄霎豳图/?毒株在细胞生长导致细胞病变■?基因型鉴定录做阴性对照。提取/?病毒的，并用随机引物特异性引物扩增种，结果均出现T反转录合成。以为模板，进行分型左右的特异性条带;一特异性引物扩增/?结果出现了鉴定。
6、一毒株和左右的特异性条带，一特异性引物扩增/?结果毒株做阳性参照，以细胞总反转万方数据畜牧与兽医年第卷第期出现型特异'毒株出现相同的特异性条带，结果表明为阴性;一/?为一基因型毒株。性条带;一'毒株出现特异性条带，结果见图。/和咖咖瑚湖瑚四•/?毒株;•？株;•一'毒株;•总对照;•特异性引物一特异性引物~扩增;•？特异性引物~扩增;.图/??分型鉴定变异的现象旧。国外疫苗主要以一弱毒讨论苗和灭活苗为主,但严重的临床症状和急性感染多由一引起，虽然种基因型病毒之间存在交叉保根据接种上皮细胞培养物后是否引起细胞病变，护，但是一疫苗不足以保护一所引起可将分
7、为种工物型:致细胞病变型.的急性感染一。，和非致细胞病变型本试验通过细胞增殖一/?分,O可在接种细胞后离株病毒,观察细胞生长状况后发现其能够在内造成细胞病变，形成空泡、核固缩、细细胞上较好地生长,具有典型的致细胞病变效应，是胞融合、凋亡等。是在细胞传代增殖屮常用的观察指标，便于病毒增殖情况及病毒生长特株型毒株。利用直接荧光抗体检测发现该毒株性的观测。毒株长期传代致弱后一般产生与特异性单克隆抗体结合,鉴定结果是株病毒分离株。提取后，利用?技特性，具有研制弱毒疫苗的可能性。不同株系之间的遗传多样性和抗原差异术鉴定其基因型为一型。一？分十分复杂，根据遗传、
8、抗原组分以及基因组离株的成功传代增殖、荧光抗体检测和?基'一区的差异，可将其分为种主要的病毒类群：因分型检测
