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1、黄花蒿中黄酮类成分的分离与鉴定卜俊恒内蒙古医学院呼和浩特010059摘要目的:在对中药黄花蒿进行了活性研究之后建立了一种高效液相色谱-串联核磁共振同时测定中药黄花蒿中黄酮类成分的方法.使用PhenomenexLuna,C18色谱柱，流动相为甲醇？水溶液67:33,在检测波长230nm下,分离出黄花蒿有效成分组中4个主要的成分，这些成分分别属于生物菇类、黄酮类;并采用核磁共振方法鉴定其结构。结果显示:本实验共鉴定出四种成分，分别是:猫眼草黄素?擱皮万寿菊素?猫眼草酚?青蒿酸。对于上溯有效成分进行鉴定，能为更好地阐明中药黄花蒿的有效成分及作用机制提供依据。关键词黄花蒿
2、;黄酮类化合物；高效液相色谱-串联核磁共振黄花篙又名青篙，为菊科植物黄花篙Artemisiaanna的干燥地上部分;具有清热解暑、除蒸、截疟等功效［1］。20世纪70年代我国学者［2］从中分离得到的青蒿素，是含有过氧基团的倍半菇内酯类化合物，治疗恶性脑疟及抗氯唾株疟疾等疾病具有高效、速效、低毒等特点，是重要的抗疟药物［3］o对于黄花蒿的研究目前主要是从植物中提取分离青蒿素，由于各种黄花蒿中的有效成分含量差别很大，有些含量很低,药用价值不大［4］o且如果黄花蒿中的有效成分含量低于5%。,就没有工业提取价值。目前主要的测定方法有结晶称重法、TLC法、HPLC法［3］等
3、，由于青蒿素只有末端吸收，因此需经柱前衍生后才能测定［5］,也有人采用HPLC-ELSD方法测定［6］。黄花蒿ArtemisiaannuaL.的主要活性成分为青蒿素，含量较低，而其中的某些黄酮类化合物可促进青蒿素与血晶素的反，增强青蒿素的抗疟性。对于黄花蒿的研究,长期以来的重点都集中于其抗疟活性成分青蒿素及其类似物上，对其中含量较高的黄酮类化合物的研究尚未见报道。作者提出高效液相色谱-串联核磁共振方法，可同吋定性、定量分析青蒿素和黄酮类化合物。1实验部分1.1仪器与材料高效液相色谱-串联核磁共振H木岛津?8A二元泵,,核磁共振检测器，色谱柱填料:PRC70DS色谱
4、柱内径:2*25cm。药材自采；甲醇为色谱纯;酸度计DELTA320上海有限公司；纯水机:上海医疗仪器厂水为二次蒸憾水。2样品处理药材混合后粉碎，用乙醇?水55:45加热回流提取3次，残渣用乙醇加热回流提取3次，合并提取液，回收溶剂,得到总黄酮。3实验条件色谱柱2*25cm;柱温25°C,流速0.2mL/mino进样量5nLo流动相：甲醇?水(67:33)检测波长230nm,在此检测波长之下理论塔板数人于2000o分离度符合要求。2结果2.1色谱条件的优化1.1色谱柱使用SymmetryShieldTMRP18色谱柱150inmX3.9mm,ID5um得到的色谱图
5、屮峰数较少，且峰较宽；换用PhneomnexeLunaC18色谱柱250mmX4.6mm,11）5um后峰数明显增多，且峰较尖锐.1.2检测波测定样品溶液的光谱图,提取从250^350nm的谱图，结果表明:在230mn波长为其最适波长。能够;兼顾各种种生物碱的分离完全且分析方法的灵敏度高，样品的整个色谱图图形良好.2.1.3柱温设置为20°C时发现温度受外界影响较大，基线有时漂移且重复性不好;适当提高柱温至25°C能够克服以上缺陷,基线平稳且使分离较好.2.1.4甲醇与水的比例分别釆用了甲醇-水溶液为50:50、62:38、67:33、70:30、75:25不同比
6、例的流动相,分析样品溶液•结果表明：甲醇-水溶液比例为67:33时,整个色谱图中大部分峰的峰形和分离度都较好；甲醇比例减小，峰形变宽保留时间延长并出现大包；甲醇比例增大，峰形变窄保留时间缩短，且出现部分重叠•故选择甲醇-水溶液67:33.2.2核磁法鉴定了其中的7个主要成分。见下图（?）图一成分的化学式猫眼草黄素Chryssplenetin1榊皮万寿菊素Quercetagetin-3,7,3'4-teramethylether2猫眼草酚ChqysosplenolD3青蒿酸Artemisinicacid4图(一)：1为猫眼草黄素;2为榊皮万寿菊素:3为猫眼草酚;4为
7、青蒿乙素化合物1:淡黄色结晶丙酮，1H-NMR600MHz,DMS0-d66:6?921H,s,H-8、7?661H,d,J2?0Hz,2、6?941H,d,J8?5Hz,H-5Z、7?611H,dd,J8?5>2?0Hz,H~6z、12?625-OH、9?954z-OH、3?91-OCH3、3?72?OCH3、3?80?0CH3、3?86?OCH3;以上数据与文献［7］中发表的光谱数据对照，基本一致，故鉴定为：猫眼草黄素(chrysoplenetin)。化合物2:黄色结晶丙酮,1H-NMR600MHz,CDC135:12?605_0H、5?736-OH、7?72
8、1H,dd
