黄花蒿中黄酮类成分的分离与鉴定

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1、黄花蒿中黄酮类成分的分离与鉴定卜俊恒内蒙古医学院呼和浩特010059摘要目的：在对中药黃花蒿进行了活性研究之后建立了一种髙效液相色谱-串联核磁共振同时测定中药黄花蒿中黄酮类成分的方法.使用PhenomenexLuna,Cl8色谱柱，流动相为甲醇一水溶液(67:33)，在检测波长230nmT,分离出黄花蒿有效成分组中4个主要的成分，这些成分分别属于生物菇类、黄酮类；并采用核磁共振方法鉴定其结构。结果显示：本实验共鉴定出四种成分，分别是：猫眼草黄素•機皮万寿菊素•猫眼草酚•青蒿酸。对于上溯有效成分进行

2、鉴定，能为更好地阐明中药黄花蒿的有效成分及作用机制提供依据。关键词黄花蒿；黄酮类化合物；高效液相色谱-串联核磁共振黄屁篙又名青篙，为菊科植物黄花^Artemisiaanna的干燥地上部分;具有清热解暑、除蒸、截疟等功效⑷。20世纪70年代我国学者⑵从中分离得到的青蒿索,是含有过氧基团的倍半祜内酯类化合物,治疗恶性脑疟及抗氯嗤株疟疾等疾病具有高效、速效、低毒等特点，是重要的抗疟药物⑷。对于黄花蒿的研究目前主要是从植物屮捉取分离青蒿素，由丁各种黄花蒿中的有效成分含量差别很大，有些含量很低，药用价值不大

3、⑷。且如果黄花蒿中的有效成分含量低于5%。，就没有工业提取价值。口前主要的测定方法有结晶称重法、TLC法、HPLC法[3]等，由于青蒿索只冇末端吸收，因此需经柱前衍生后才能测定⑸，也有人采用HPLC-ELSD方法测定⑹。黄花iWArtcmisiaannuaL.的主要活性成分为青蒿素，含量较低，而其中的某些黄酮类化合物可促进青蒿素与血晶素的反，增强青蒿素的抗疟性。对于黄花蒿的研究,长期以来的重点都集中于其抗疟活性成分青蒿素及其类似物上，对其中含量较高的黄酮类化合物的研究尚未见报道。作者提出高效液相色

4、谱-串联核磁共振方法,可同吋定性、定量分析青蒿素和黄酮类化合物。1实验部分1.1仪器与材料高效液相色谱-串联核磁共振(日本岛津一8A二元泵，，核磁共振检测器，色谱柱填料:PRC-ODS色谱柱内径：2*25cm)。药材自采；甲醇为色谱纯；酸度计(DELTA320)(上海)有限公司；纯水机:上海医疗仪器厂水为二次蒸谓水。1.2样品处理药材混合后粉碎，用乙醇一水(55:45)加热冋流提取3次，残渣用乙醇加热冋流提取3次，合并提取液，回收溶剂,得到总黄酮。1.3实验条件色谱柱(2*25cm);柱温25°C

5、,流速0・2mL/mino进样量5uLo流动相：甲醇一水(67:33)检测波长230nm,在此检测波长之下理论塔板数大于2000。分离度符合要求。2.1色谱条件的优化2.1.1色谱柱使用SymmetryShie1dTMRP18色谱柱(150mmX3.9mm,ID=5um)得到的色谱图中峰数较少，JI峰较宽；换用PhncomncxcLunaC18色谱柱(250mmX4.6mm,ID=5um)后峰数明显增多，且峰较尖锐.2.1.2检测波测定样品溶液的光谱图，提取从250〜350nm的谱图，结果表明：在

6、230nm波长为其最适波长。能够；兼顾各种种生物碱的分离完全且分析方法的灵敏度高，样品的整个色谱图图形良好.2.1.3柱温设置为20°C时发现温度受外界影响较大，基线有时漂移且重复性不好;适当提高柱温至25°C能够克服以上缺陷，基线平稳且使分离较好.2.1.4甲醇与水的比例分别釆用了甲醇-水溶液为(50：50)、(62：38)、(67：33)、(70：30)、(75:25)不同比例的流动相，分析样品溶液•结果表明：甲醇-水溶液比例为67:33时,整个色谱图屮大部分峰的峰形和分离度都较好；甲醇比例减

7、小，峰形变宽保留时间延长并出现大包；甲醇比例增尢峰形变窄保留吋间缩短，且出现部分重叠•故选择甲醇-水溶液(67:33).2.2核磁法鉴定了其屮的7个主要成分。见下图(一)图(一)成分的化学式OHOCH3猫眼草黄素Chryssplcnctini-OCH//榊皮力寿菊素Qucrcetagetin-3,7,3，4-teramethylether2猫眼草酚ChqysosplenolD3青蒿酸Artcmisinicacid4图（一）：1为猫眼草黄素；2为榊皮万寿菊素；3为猫眼草酚；4为青蒿乙素化合物1：淡黄

8、色结晶(丙酮),1H-NMR(600MHz,DMS0-d6)5：6*92(1H,s,H-8)、7-66(1H,d,J=2•0Hz,H-2’)、6-94(1H,d,J=8•5Hz,H-5‘)、7•61(1H,dd,J=8•5、2-0Hz,H-6')、12•62(5—OH)、9•95(4‘—OH)、3•91(-0CH3)、3•72(—0CH3)、3•80(—OCH3)、3-86(-0CH3);以上数据与文献［7］中发表的光谱数据对照，基本一致，故鉴定为：猫眼草黄素(chrysoplen