黄花蒿多倍体的诱导与鉴定

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1、黄花蒿多倍体的诱导与鉴定　　摘要：利用秋水仙素，采用浸泡法和固体培养法分别对黄花蒿（ArtemisiaannuaL.）丛生芽进行多倍体诱导，以期获得黄花蒿多倍体种质。结果表明，以5000mg/L秋水仙素浸泡丛生芽5d处理获得的诱导效果最好，诱导率可达40%。对性状变异明显的黄花蒿植株进行染色体数目观察，发现了黄花蒿四倍体和嵌合体。　　关键词：黄花蒿（ArtemisiaannuaL.）；多倍体诱导；组织培养；秋水仙素；染色体鉴定　　中图分类号：S567.23+9.1文献标识码：A文章编号：0439-8114（2016）10-2591

2、-04　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.10.035　　Abstract：InordertoobtainnewpolyploidgermplasmofArtemisiaannuaL.，immersingandsolidculturemethodwithcolchicineswereusedforpolyploidyinduction.Theresultsshowedthatthebudsimmersedin5000mg/Lcolchicinefor5dhadthehighestpol

3、yploidyinductionrateas40%.TetraploidandchimeraplantswerefoundbyobservingthechromosomenumbersofA.annuapolyploidplantswithobviousphenotypicvariances　　Keywords：ArtemisiaannuaL.；polyploidyinduction；tissueculture；colchicine；chromosomeidentification9　　黄花蒿（ArtemisiaannuaL.）又

4、名青蒿、臭蒿、香蒿、苦蒿，为菊科（Compositae）蒿属（ArtemisiaL.）一年生草本植物，是传统中药，具有清热解暑，除蒸，截疟的功效，早在公元340年东晋医药学家葛洪《肘后备急方》中就有记载。黄花蒿作为重要的药用植物，是一种宝贵的生物资源，其分布极其广泛，是世界广布种，但世界上青蒿素类药物的原料80%～90%来自中国。黄花蒿中的主要成分青蒿素是一种具有过氧桥基的倍半萜内酯[1]，有速效和低副作用的抗疟性能[2]，是中国惟一进入美国药典（USP）、并作为国际惟一注册销售的源于传统中药且具有中国知识产权和国际专利的重要天然

5、药品，同时也是被WHO推荐的首选基本目录药物，特别是对脑型疟疾和抗氯喹性疟疾有很好的疗效[3]。黄花蒿基因型较为丰富，在自然条件下相对比较难以实现优良基因资源的人工保存及其繁殖利用[4]；而组织培养技术则可以克服以上问题。利用秋水仙素结合组织培养诱导多倍体育种技术已经被广泛应用于多种植物上，如黄蝉兰[5]、桔梗[6]、甜叶菊[7]、鸡蛋参[8]等。国内外有关黄花蒿多倍体研究已有少许报道[9-11]，并取得了相似的试验结果，这表明在离体条件下利用秋水仙素诱导黄花蒿多倍体具有可行性，但未见生产应用的报道。试验以黄花蒿为材料，结合已有的

6、黄花蒿组织培养技术[12-15]，通过秋水仙素诱导黄花蒿多倍体种质进行多倍体培养，以期为黄花蒿良种繁育工作提供理论依据和实践指导。　　1材料与方法　　1.1材料9　　试验以广西药用植物园科研基地种植的黄花蒿幼嫩枝条为供试活体材料。化学试剂主要有MS培养基（自配）、HgCl2、NaClO、6-BA（6-苄基氨基嘌呤）、NAA（萘乙酸）、秋水仙素、KT（6-糠氨基嘌呤）、IBA（吲哚丁酸）、高锰酸钾、甲醛、乙醇、对二氯苯、α-溴萘、卡诺固定液、苯酚品红、HCl、醋酸等。仪器主要有无菌接种箱、培养摇床、培养箱、冰箱、水浴锅、徕卡DM25

7、00型双目生物显微镜、照相机等。　　1.2方法　　1.2.1培养条件培养条件均为温度（25±2）℃、光照度1500～2000lx、光照时间12h/d、相对空气湿度75%～85%。不定期用70%乙醇喷雾杀菌降尘，并定期用高锰酸钾和甲醛混合液对培养室进行密闭熏蒸消毒。　　1.2.2丛生芽培养采用黄花蒿枝条中上部的嫩茎，用中性洗涤剂洗涮后，流水漂洗30min，吸干水分，用0.05%升汞（HgCl2）灭菌5min，再用饱和次氯酸钠（NaClO）灭菌15min，然后用无菌水冲洗5次，切成1.5cm左右的茎段，接种于MS+0.05mg/L的6

8、-BA+0.01mg/L的NAA培养基上，诱导丛生芽。　　1.2.3多倍体的诱导①浸泡法。将分化程度基本一致的黄花蒿丛生芽浸泡于浓度分别为500、1000、2500、5000mg/L的经过滤膜灭菌的无菌秋水仙素溶液中，并置于摇床上分别振荡培养2、3