阿维a对硬皮病小鼠的治疗作用及机制研究

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1、阿维A对硬皮病小鼠的治疗作用及机制研究［摘要］目的研究阿维A(acitretin)对系统性硬皮病(SSc)小鼠皮肤及肺部纤维化的治疗作用，并通过检测小鼠外周血Thl7/Treg相关因子白介素(IL)-17.IL-10、IL-6、转化生长因子(TGF)-B1水平，探讨阿维A治疗硬皮病可能的机制。方法24只雌性BALB/c小鼠随机分为対照组、硬皮病组和阿维A组，硬皮病组和阿维A组给予博莱霉素皮下注射4周，阿维A组同时每天给予6mg/kg的阿维A灌胃4周。4周后取注射部位皮肤及肺部制作组织病理切片，观察小鼠皮肤厚度及皮肤/肺部炎症。酶联免疫吸附法(ELISA

2、)检测小鼠血清IL-17、IL-10、IL-6、TGF-31水平。结果阿维A组皮脐厚度、皮肤炎症评分、肺部炎症评分均明显低于硬皮病组［(140.25±20.24)um比(191.88±40.95)um,(0.75±0.01)分比(2.00±0.76)分，(1・38土0・52)分比(2.00±0.92)分,P<0.05］。阿维A组血清11-17.IL-6、TI-10均显著低于硬皮病组［(50.69±11.72)pg/mL比(66.89±16.62)pg/mL,(85.77±12.06)pg/mL比(118.68±22.62)pg/mL,(57.65±21

3、.74)pg/mL比(131.07±22.52)pg/mL,P<0.05］o三组小鼠血清TGF-B1水平差异无统计学意义。结论阿维A可显著改善硬皮病小鼠皮肤及肺部症状，其作用机制可能与影响Thl7/Treg的平衡有关。［关键词］硬皮病；阿维A；IL-17；IL-6；IL-10［中图分类号］R593.25［文献标识码］A［文章编号］1673-7210(2013)09(a)-0020-03系统性硬皮病(systemicsclerosis,SSc)是一种以皮肤及内脏器官纤维化或硬化，最后发展至萎缩为特点的结缔组织病［1］。在我国结缔组织病中硕皮病的发病率高，

4、病因及发病机制复杂，治疗手段有效。维A酸类药物在表皮分化、真皮重建及皮肤炎症中发挥重要作用，临床上主要用于治疗银屑病、痙疮及角化过度性皮肤病。近年來，维A酸的抗纤维化作用逐渐得到认识，文献报道阿维A可缓解硬皮病患者皮肤硬化，且对皮肽硬化为主的移植物抗宿主病(GVHD)冇效［2-3］o本试验利用博来霉素构建小鼠硕皮病模型，观察阿维A对皮肤和肺部纤维化的治疗作用。辅助T细胞17(Thl7)是一种新的T细胞亚群，主要分泌白介素(IL)-17和IL-6,其在自身免疫病和过敏性疾病中发挥重要的免疫调节作用。调节性T细胞(Treg)与Thl7细胞均来源于共同的前体

5、细胞CD4+T细胞,两者关系密切，Treg细胞主要分泌转化生长因子(TGF)和IL-10,在免疫耐受的诱导中发挥重耍作用，抑制自身免疫性疾病的发生［4］。文献报道硬皮病患者存在外周血Thl7/Treg细胞体系失衡，本研究通过检测小鼠外周血Thl7/Treg相关因子IL-17、IL-6、IL-10、TGF-01,探讨阿维A治疗硬皮病可能的机制，为硬皮病的发病机制及治疗提供新的思路。1材料与方法1.1材料1.1.1实验动物6周龄雌性SPFBALB/c小鼠，体重16〜20g,共24只，购于北京维通利华实验动物技术有限公司，饲养于北京大学实验动物中心，置于清洁

6、级环境，普通饲料和水饲养。1.1.2主要实验试剂注射用盐酸闿來霉素(BLM),15mg/支，产自日本化药株式会社。阿维A胶囊，10mg/粒，产自重庆华邦制药公司。小鼠IL-17、IL-10、IL-6、TGF-B1酶联免疫吸附试验(ELISA)检测试剂盒购自武汉博士徳生物工程有限公司。1.2方法1.2.1动物分组、模型的建立及给药方法24只小鼠随机分为对照组、硬皮病组和阿维A组，每组8只。实验前用脱毛膏将背部毛发去除，标记出一个1cmXlcm大小的注射区。参照文献［5］建立SSc动物模型：对照组以酸盐缓冲液(PBS)皮下注射，每次0.1mL,每日1次，共

7、4周；硕皮病组和阿维A组以300卩g/mL浓度的博莱簿素液皮下注射，每次0.1mL,每口1次，共4周。同时，在开始皮下注射博莱霉素的当天，对照组、硬皮病组以0.9%NaCl灌胃,每00.2mL,阿维A组则用0.5mg/mL的阿维A溶液按照6mg/(kg•d)剂量灌胃(依照人体给药剂量0.5mg/(kg•d)换算成小鼠的治疗剂量为6mg/(kg-d),每日灌胃约0.2mLo1.2.2标本的留取最后一次注射、灌胃24h后，小鼠通过眼眶动脉放血处死，收集血液1〜2mL,以3000r/min离心20min,吸取上层血清，用ELISA法检测IL-17、IL-10

8、、IL-6、TGF-B1水平，按试剂盒操作说明书进行。取小鼠背部无毛皮肤及肺脏，投入10%甲醛