银耳多糖对小鼠移植性肝癌治疗作用及机制的实验研究

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1、维普资讯http://www.cqvip.com·l662·中国老年学杂志2006年l2月第26卷银耳多糖对小鼠移植性肝癌治疗作用及机制的实验研究曲萌董志恒盖晓东毕胜利王冰梅(北华大学医学院分子生物教研室，吉林吉林132013)【摘要】目的研究银耳多糖(TremellaPolysaccharide，TP)对荷HAC小鼠T细胞表面分化抗原、细胞因子、体外肿瘤细胞的杀伤作用及小鼠移植性肝癌的影响。方法用环碑酰胺和11P分别作用于荷HAC肝癌小鼠，采用免疫荧光法、流式细胞仪及酶标仪观察各组免疫功能的变

2、化及细胞因子的表达。并分离其脾细胞，将诱导的细胞毒性T细胞(CTL细胞)分别作用于体外培养的H-TdR标记的肿瘤细胞P815、HAC和B16。4h后用一闪烁记数仪进行检测。并记算杀伤程度。检测各组肿瘤重量、体积、组织学改变和主要脏器的形态学改变。结果11P实验组总T细胞、T杀伤细胞及肿瘤坏死因子(TNF)分别为(62．3±1．06)、(25．6±O．87)及(87．5±O．5)，高于对照组，其中对总T细胞及TNF上调明显。在对HAC、P815、B16肿瘸细胞的杀伤作用中。TP实验组的杀伤话性明显

3、高于对照组。分别为23．85％、20．81％、25．43％(P(O．O1)。其中对BI6杀伤作用最强，HAC次之，P815最弱。环礴酰胺+rP实验组上述指标与rP实验组相比有所下降，但与对照组相比则明显增高(P(0．05)。治疗组肝肿瘤重量、体积均低于模型组。组织学上肿瘤坏死程度重且范围广，淋巴细胞、巨噬细胞浸润明显。纤维组织增生显著。环磷酰胺组较实验组表现的更为明显rP实验组除脾脏外。其他主要脏器无明显形态学变化。结论rP具有激活和提高特异性和非特异性杀伤细胞的抗肿瘤作用。[荚t词)TP；移植

4、性肝癌；生物治疗【中豳分类号】R979．1[文献标识码】A[文章一号】1005-9202(2006)12-1662．04以往治疗肝癌多采用手术及术后放、化疗的方法，这种传w；环磷酰胺对照组(B组)接种肝癌细胞，并在接种后的第1、统方法存在着无法保证切除所有的肿瘤细胞，不能抑制肿瘤的7、14天以20mg／kg腹腔注射环磷酰胺；环磷酰胺+rI'P实验组转移，且在杀伤肿瘤细胞的同时也损伤了正常组织等缺点。严(c组)接种肝癌细胞，并在接种后的第1、7、14天分别以20重地影响了治疗进程。银耳多糖(Tre

5、mellaPolysaccharide，TP)mg／kg和50mg／kg腹腔注射环磷酰胺和11P；rI'P实验组(D组)是一种含蛋白多糖，为银耳的重要有效成分，现代药理学研究接种肝癌细胞，并以50mg／kg腹腔注射rI'P，连续4W。证明，TP具有抑制肿瘤生长。提高机体免疫，延缓衰老，抗突l-2．3癌模型的复制取原发性肝癌腹水型带瘤小鼠，于超变、抗放射及提高巨噬细胞吞噬功能和促进脾细胞产生IL-2等净工作台内行腹腔穿刺术，抽取腹水。碘酒、酒精二次消毒腹作用¨’‘】，其对癌细胞并不具有直接抑制或杀

6、伤作用，它对癌部皮肤，用5Illl注射器吸取2ml注射用生理盐水，9号粗针头瘤的抑制作用是通过中间宿主效应，即可能通过机体增强对癌于中下腹部穿过皮肤和腹腔，抽取含瘤细胞腹水3Illl，用生理瘤的免疫功能等途径而实现的。我们对rI'P的体内、外抗肝癌盐水以1：8稀释成细胞悬液，于小鼠左腋下皮下接种0．2mi／生物治疗作用进行研究，并对其对体内主要脏器的影响进行检鼠(约2×10。个细胞)。测，探讨rI'P对肝癌生物治疗作用及作用机制，为肝癌的更好防l-2．4脾细胞悬液的制备无菌获取不同组别荷瘤小鼠的

7、脾治提供新的靶向及手段。脏。置于100目尼龙网上轻轻碾碎，加适量Hanks液混悬，3次过滤，加Tris．NH4Cl溶解残余的红细胞。以含2％NBS的HBSSl材料和方法离心(1500r／rain，8min)洗涤。用1640培养液还原细胞至41．1动物纯系BALB／C小鼠由吉林省药品检验所实验动物m1左右，铺于小鼠淋巴细胞分离液上(比重为1．088)，离心2部提供，原发性肝癌腹水型带瘤小鼠购自中科院药物研究所。000r／rain，20min。吸取单个核淋巴细胞(PBL)，1500r／rain，81

8、．2方法rain洗涤细胞2次。用含IL-2(1000U／m1)和30％FCS的16401．2-1试剂与仪器RPMI-1640培养液；Tris-NH4Cl：0．83％培养液调整PBL浓度为2×10／ml，待用。NH‘CI；Hanks液：HBSS；结晶紫：北京化工厂；MrI-I．：Signm公司；1．2．5HAC肝癌细胞的制备、处理无菌抽取含瘤细胞腹环磷酰胺：上海第十二制药厂；TP：购自福建省三明真菌研究水。制备成细胞悬液，1500r／rain，8min离心、洗涤。细胞经小所；IL-2：Boehri