课题1DNA的粗提取与鉴定学案

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1、专题五课题1DNA的粗提取与鉴定【学习目标】1、通过尝试对植物或动物组织中的DNA进行粗提取，了解DNA的物理化学性质。2、理解DNA粗提取与鉴定的原理【基础知识】—・提取DNA的方法提取生物大分子的基本思路是o对于DNA的粗提取而言，就是要利用、和等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA,去除其他成分。-）DNA的溶解性：DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离目的。图5—1是DNA在NaCI溶液中的溶解度曲线，请根据曲线图，思考:%1DNA在不同浓度NaCI溶液中

2、溶解度有何特点?%1要使DNA溶解，需要使用什么浓度？%1要使DNA析出，又需要使用什么浓度？%1采用DNA不溶于酒精的原理，可以达到什么目的?二）DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性：蛋白酶能水解,但是对没有影响。大多数蛋白质不能忍受60-80oC的高温，而DNA在以上才会变性。洗涤剂能够瓦解,但对DNA没有影响。三）DNA的鉴定：在条件下，DNA遇会被染成色,因此二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。二.实验设计1）实验材料的选取：凡是含有—的生物材料都可以考虑，但是，选用的生物组织，成功的可能性更大。%1思考：哺乳动物的红细胞、肠杆菌的特点2）破碎细胞，获取含

3、DNA的滤液：动物细胞的破碎比较,以鸡血细胞为例，在鸡血细胞液中加入一定量的，同时用搅拌，过滤后收集即可。如果实验材料是细胞，需要先用溶解细胞膜。例如，提取洋葱的DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的和,进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集o%1思考：为什么加入蒸帼水能使鸡血细胞破裂?%1思考：加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么?%1思考：在处理植物组织时需要进行研磨，其目的是什么？如果研磨不充分,会对实验结果产生怎样的影响？3)去除滤液中的杂质：方案一的原理是利用DNA在不同浓度的NaCI溶液中不同，方案二直接在滤液中加,原理是o方案三将滤液放在o原理是%1思考：

4、为什么反复地溶解与析出DNA,能够去除杂质？4)DNA的析出与鉴定:将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积、冷去卩的静置,溶液中会出现,这就是粗提取的DNA。用玻璃棒搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水分。⑨取两支20ml的试管，各加入物质的量浓度为的NaCI溶液5ml,将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4ml的o混合均匀后，将试管置于中加热5min,待试管冷却后，比较两支试管溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否变_。三.操作提示:1•以血液为实验材料时，每100ml血液中需要加入3g,防止O2•加入洗涤剂

5、后，动作要、,否则容易产生大量的泡沫，不利于后续步骤地操作。加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要,以免,导致DNA分子不能形成絮状沉淀。3.二苯胺试剂要,否则会影响鉴定的效果。4.操作步骤备鸡血细胞液加,静置或离心破碎细胞，释放DNA・••加,同一方向快速通方向搅拌I—过滤，除去、等。溶解核内DNA加入至,同一方向缓慢搅拌DNA析出加蒸f留水至0.14mol/L,过滤，在溶解到2moI/L溶液中I除去细胞质中的大部分物质。DNA初步纯化与等体积95%冷却酒精混合，析出I除去、、等。DNA鉴定二苯胺，沸水浴，呈现