课题DNA的粗提取与鉴定

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1、普通高中课程标准实验教科书——生物选修1［人教版］课题1DNA的粗提取与鉴定★课题目标（一）知识与技能1、通过尝试对植物或动物组织屮的DNA进行粗提取，了解DNA的物理化学性质。2、理解DNA粗捉取与鉴定的原理（二）过程与方法掌握DNA如提取计数，能利用DNA的性质进行实验设计和操作（三）情感、态度与价值观通过对DNA的粗提取的实验过程的设计及操作，锻炼科学的思维方法，培养实事求是的科学态度。★课题重点DNA的粗提取和鉴定方法★课题难点DNA的粗提取和鉴定方法★教学方法启发式教学★教学工具多媒体课件★教学过程（-）引入新课无论是果胶酶还是加酶洗衣粉中的酶制剂，都是从细胞中提取出来的

2、。从今天开始,我们学习生物化学成分的提取与改造技术。（二）进行新课1.基础知识1.1DNA粗提取的原理提取DNA的原理包括DNA的溶解性和耐受性两个方而。问：提取DNA的溶解性原理包括哪些方而？DNA在不同浓度NaCI溶液屮溶解度不同；DNA不溶于酒精。1.1.1分析图5-loDNA在不同浓度NaCI溶液屮溶解度有何特点？要使DNA溶解,需要使用什么浓度？要使DNA析出，乂需要使用什么浓度？在0.14mol/L时溶解度最小；较高浓度可使DNA溶解；0.14mol/L可使DNA析出。1.1-2在溶解细胞中的DNA时，人们通常选用2mol/LNaCI溶液：将DNA分了析出的方法是向溶有

3、DNA的NaCI溶液屮缓慢注入蒸懈水，以稀释NaCI溶液。酒精是一种常用有机溶剂，但DNA却不能溶于酒精（特别是95%冷却酒精），但细胞中蛋口质可溶于酒精。问：采用DNA不溶于酒精的原理，可以达到什么目的？将DNA和蛋白质进一步分离。1.1.3提取DNA还可以利用DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性原理。利用该原理时，应选用怎样的酶和怎样的温度值？蛋口酶，因为酶具有专一性，蛋口酶只水解蛋口质而不会对DNA产生影响。温度值为60-80°C,因为该温度值蛋白质变性沉淀，而DNA不会变性。补充：DNA的变性是指DNA分子在高温下解螺旋，其温度在80°C以上，如在PCR技术屮DNA变性温度在9

4、5°C。思考：观察图5・2,洗涤剂在提取DNA中有何作用？洗涤剂将细胞膜上的蛋白质，从而瓦解细胞膜。1.2DNA的鉴定原理当鉴定提取岀的物质是否是DNA时，需要使用什么指示剂进行鉴定?在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺呈现蓝色。原理总结。通过利用不同浓度NaCI溶液溶解或析出DNA,可以从细胞中提取和提纯DNA；再利用酒精进一步将DNA»j-蛋白质分离开来，达到提纯的目的；最后利用二苯胺试剂鉴定提取的物质是否是DNAo1.实验设计2.1实验材料2.1.1不同牛物的组织中DNA含量不同。在选取材料时，应本着DNA含量高、材料易得、便于提取的原则。你认为教材提供的材料中哪些不适合提取DNA

5、?哺乳动物的血液和液体培养基中的大肠杆菌。2丄2从核DNA数目來看，猪38条，鸡78条，哺乳动物血0条，獗猴桃58条，洋葱16条，豌豆14条，菠菜12条，大肠杆菌1条。请选择动植物材料各一种。鸡血、獗猴桃。2.2破碎细胞，获取含DNA的滤液若选用鸡血和洋葱作实验材料，则怎样获取含DNA的滤液？在鸡血细胞液中加入一定量蒸懈水并用玻棒搅拌，过滤后收集滤液；切碎洋葱，加入一定量洗涤剂和食盐，搅拌研翳，过滤后收集滤液。在以上实验中，加入蒸憾水、洗涤剂和食盐的作用分别是什么？过滤时应当选用（滤纸、尼龙布）。血细胞在蒸徭水中大量吸水而张裂；洗涤剂瓦解细胞膜；食盐溶解DNA物质；选用尼龙布进行过

6、滤。在处理植物组织时需要进行研磨，其目的是什么？研磨不充分产生什么结果？破碎细胞壁，使核物质容易溶解在NaCI溶液中；研磨不充分会使DNA的提取量减少。具体做法。10mL鸡血+20mL蒸懈水〜同方向搅拌一3层尼龙布过滤一滤液2.3去除滤液中的杂质最初获得的DNA滤液含有蛋白质、脂质等杂质，需要进一步提纯DNA。阅读教材提供的三种方法，分析其中的原理。方案一的原理是DNA在不同浓度NaCI溶液中溶解度不同；方案二的原理是蛋白酶分解蛋口质，不分解DNA；方案三的原理是蛋白质和DNA的变性温度不同。具体做法。方案一：30mL滤液+35gNaCI-＞同方向搅拌，DNA溶解一加入蒸锚水一DN

7、A析出过滤得到过滤物一放到2mol/LNaCI溶液屮溶解-＞DNA-NaCI溶解液方案二30mL滤液+嫩肉粉（木瓜蛋白酶）一静置10〜15分钟一DNA滤液方案三：30滤液一60〜67°C处理〜过滤获得DNA滤液1.4DNA析出与鉴定在滤液中仍然含有一些杂质，怎样除去这些杂质呢？得到的DNA呈何颜色？滤液为等体积的冷却酒精混合均匀，静置2〜3分钟，析出的白色丝状物就足DNA。DNA呈白色。怎样鉴定析岀的白色丝状物就是DNA呢？阅读教材。阅读。简述DNA的鉴定过程。具体做