课题5DNA的粗提取与鉴定

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1、课题5DNA的粗提取与鉴定【课题】：课题5DNA的粗提取与鉴定【备课人】：【备课时间】:【上课时间】：【课型】:复习【课时数】：1课时【复习冃标】本课题通过尝试对植物或动物组织中的DNA进行粗提取，了解DNA的物理化学性质，理解DNA粗提取以及DNA鉴定的原理。【复习重点与难点】复习重点：DNA的粗提取和鉴定方法。复习难点：DNA的粗提取和鉴定方法。【知识冋顾】一、实验原理提取生物大分子的基木思路是选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。对TDNA的粗捉取而言，就是要利用DNA-与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA

2、,去除其他成分。1.DNA的溶解性DWA和蛋门质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液屮溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离冃的。此外，DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋口质进一步的分离。2.DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性蛋白酶能水解蛋白质，但是对D7A没有影响。大多数蛋白质不能忍受60-80oC的高温，而DNA在80oC以上才会变性。洗涤剂能够瓦解，但对DNA没有影响。3.DNA的鉴定在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色，因此二苯胺口J以作为鉴定

3、DNA的试剂。二、实验设计1.实验材料的选取凡是含有DNA的生物材料都可以考虑，但是使丿IJDNA含量相对较髙的生物纽织，成功的可能性更大。2.破碎细胞，获取含DNA的滤液动物细胞的破碎比较容易，以鸡血细胞为例，在鸡血细胞液屮加入一定量的蒸谓水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可。如果实验材料是植物细胞，需要先用洗涤剂溶解细胞膜。例如，捉取洋葱的D7A时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液。注意:%1为什么加入蒸餾水能使鸡血细胞破裂？蒸饰水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅拌

4、的机械作川，就加速了鸡血细胞的破裂（细胞膜和核膜的破裂），从而释放出DNAo%1加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA的释放；食盐的主要成分是NaCl,有利于DNA的溶解。%1如果研磨不充分，会对实验结果产牛怎样的影响?研糜不充分会使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。%1此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？可能含有核蛋白、多糖和RA等杂质。2.去除滤液中的杂质方案一的原理是DNA在不同浓度NaCl溶液屮溶解度不同；方案二的原理是蛋门酶分解

5、蛋白质，不分解DNA；方案三的原理是蛋白质和D7A的变性温度不同。注意:①为什么反复地溶解与析出DNA,能够去除杂质？川高盐浓度的溶液溶解DNA,能除去在高盐屮不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出DNA,就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质。②方案二与方案三的原理有什么不同？方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的DNA与蛋白质分开；方案三利用的是DNA和蛋门质对高温耐受性的不同，从而使蛋门质变性，与DNA分离。2.DNA的析出与鉴定将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积相等、冷却的酒精溶液，静置2〜3m

6、in,溶液屮会出现白色丝状物，这就是粗捉取的DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上而的水分。取两支20ml的试管，各加入物质的量浓度为2mol/L的NaCl溶液5ml,将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4ml的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min,待试管冷却后，比较两支试管溶液颜色的变化，看看溶解有DZA的溶液是否变蓝。三、实验步骤一以洋葱为实验材料1.称取30克已切碎的洋葱,放入研钵中,加入少量石英砂助研,倒入lOmL2mol/L的氯化钠溶液，充分研磨。洋葱含有挥发性刺激物，有效减

7、少刺激，才能使实验顺利进行。上课前，教师可先将洋葱放入冰箱冷冻一会儿，使其凉透但又不能结冰；或将洋葱切成几人块，放入清水泡一会儿，让具挥发性刺激物溶于水，叮以减轻刺激。然后将洋葱切碎备川。研磨的目的主耍是使洋葱细胞破裂，使DM溶于加ol/L的氯化钠溶液，没必要将洋葱研成粥糊状，后者既浪费时间又影响实验效果。研磨时，切忌使用搅拌器（榨汁机）。使用搅拌器虽对以提高研磨效率，但搅拌器将洋葱切成极细小的颗粒，无法通过过滤将洋葱颗粒剔除。只能将酒精直接倒入滤液中，许多洋葱小颗粒因为轻会漂浮起來，D7A藏在其中，无法分辨。学生看不到白色纤维状粘稠物的DNAo2.研磨后，川漏斗

8、和纱布将汁