专题5DNA和蛋白质技术课题1DNA的粗提取与鉴定

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1、专题5DNA和蛋白质技术课题1DNA的粗提取与鉴定【课题目标】本课题通过尝试对植物或动物组织中的DNA进行粗捉取，了解臥A的物理化学性质，理解DNA粗提取以及DNA鉴定的原理。【课题重点】DNA的粗提取和鉴定方法。【课题难点】DNA的粗提取和鉴定方法。【知识要点】1.DNA的物理化学性质，尤其是DNA的溶解性；2.二苯胺法鉴定DNA的方法和原理。【学习导航】—*、基础知识（-）DNA粗提取的原理DNA粗提取的原理包括DNA的溶解性和耐受性两个方而。1.DNA的溶解性：包括DNA在NaCl溶液小的溶解性和在酒精屮的溶解性（1）DNA在NaCl溶液中的

2、溶解性（见课本P54图5-1）问1:DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度有何特点？问2：要使DNA溶解，需要使用什么浓度？要使DNA析出，乂需要使用什么浓度?（2）DNA在酒精中的溶解性：DNA酒精（特别是95%冷却酒精），但细胞中蛋口质酒粕。（填“可溶于”或“不溶于”）问：采用DNA不溶于酒精的原理，可以达到什么目的？2.DNA的耐受性（1）对于酶的耐受性：蛋白酶能水解,但对DNA（填“冇”或“没冇”）影响。（2）对于高温的耐受性：多数蛋口质不能忍受°C的高温，而DNA在°C以上才会变性。（3）对于洗涤剂的耐受性：洗涤剂能够瓦解，但对DNA（填“

3、冇”或“没冇”）影响。问：利用该原理提取DNA吋，应选用怎样的酶和怎样的温度值？2.DNA鉴定的原理在条件下，DNA遇会被染成色,因此，可以作为鉴定DNA的试剂。二、实验设计（一）实验材料的选取应本着的原则o问1：教材捉供的材料中哪些不适合捉収DNA?问2：从核DNA数忖来看，猪38条，鸡78条，哺乳动物血0条，筛猴桃58条，洋葱16条，豌豆14条，菠菜12条，大肠杆菌1条。请选择动植物材料各一种。（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液问1：若选用鸡血和洋葱作实验材料，则怎样获取含DNA的滤液？在鸡血细胞液中加入一定量并用玻棒,过滤后收集滤液洋葱，加入

4、一定量和,,过滤后收集滤液。问2：在以上实验中，加入蒸係水、洗涤剂和食盐的作用分别是什么？过滤时应当选用（滤纸、尼龙布）？蒸憎水的作用：洗涤剂的作用：食盐的作用：过滤时应当选用：问3：处理植物组织时进行研磨目的是什么？研磨不充分产牛.什么结呆？（三）去除滤液中的杂质最初获得的DNA滤液含有蛋口质、脂质等杂质，需要进一步捉纯DNA。阅读教材捉供的三种方法，分析其中的原理是什么？方案一：方案三：（四）DNA析出与鉴定问1：在滤液中仍然含冇一些杂质，怎样除去这些杂质，析!llDNA呢？得到的DNA呈何颜色？问2：怎样鉴定析出的口色丝状物就是DNA呢?三、

5、实验步骤1、制鸡血细胞液（活鸡鲜血经离心分离或沉淀获得）0.1g/mL柠檬酸钠1OOmL}500mL烧杯中，玻棒搅拌，离心、分离或静置沉淀活鸡鲜血180mL2、提取DNA。（1）提収血细胞核物质：%1取血细胞5-10mL+20mL蒸懈水，用玻棒沿一个方向快速搅拌。%1纱布过滤：滤液中含DNA和其他核物质，如蛋白质。（2）溶解核内的DNA：滤液+2mol/L的NaCl溶液40mL,玻棒沿一个方向轻缓搅扌半。（3）析出含DNA的粘稠物:在上述溶液中缓缓加入蒸饰水，并沿一个方向轻轻搅拌，出现丝状物；当丝状物不在增加时,停止加水（此时NaCl溶液的浓度相当

6、于0.14mol/L）o（4）滤取含DNA的粘稠物：用多层纱布过滤，含DNA的粘稠物留在纱布上。（5）DNA粘稠物的再溶解：步骤⑷含DNA的粘稠物+20mL2mol/L的NaCl溶液一在20mL烧杯中轻缓搅拌3min,使尽可能多的DNA溶解在NaCl溶液。（6）过滤含有DNA的NaCl溶液：用放冇两层纱布的漏斗过滤步骤⑸所得的溶液，滤液中含冇DNAo(7)提取含冇杂质较少的DNA：步骤⑹所得的滤液十体积分数为95%的冷却酒梢50mL,用玻棒沿一个方向轻缓搅拌，溶液屮(析出)出现乳口色丝状物，用玻棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。3、DNA的鉴

7、定：试管2支，编号甲乙一各加2mol/LNaCl溶液5mL-甲中放入少量白色丝状物，搅拌使之溶解一各加4mL二苯胺，混合均匀"沸水浴5min-观察甲小是否变蓝【实验小结】1.共有“三次过滤，两次析出，七次搅拌”。2.加入“两次蒸餾水，三次NaCl溶液，一次酒精覽3.其它注意事项：在鸡血中加入柠檬酸钠防止凝

8、古

9、；鸡血静置或离心以捉高细胞悬液浓度；使用塑料烧杯；使用尼龙布过滤；玻棒沿同一方向搅拌；玻棒搅拌要缓慢(细胞破裂快速搅拌)；玻棒不要碰到烧杯壁；二苯胺试剂要现用现配等。为了提高DNA纯度，在科学实验中通常使用的洗涤剂有十六烷基三甲基浪化钱(CT

10、AB)、十二烷基硫酸钠(SDS)o4.表格梳理方法步骤加入物质目的(阐述于表格下)1.制备鸡血细胞液柠檬酸钠溶液①2.提取