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1、滋阴明目丸微生物限度检查方法的建立【关键词】滋阴明目丸；微生物限度检查；验证试验滋阴明目丸是由熟地黄、黄精、枸杞子、山药、当归、川莒等17味中药组方而成的复方制剂。对其进行微生物限度检查时，按照规定[1],必须进行方法验证试验，为此本试验对滋阴明目丸微生物限度的具体检查方法进行了验证,现总结现报道如下。1仪器与试药Q/YYX1030-82型电热手提式压力灭菌器；101-2s电热恒温鼓风干燥箱（上海跃进医疗器械厂）；DHP781型恒温培养箱（湖北省黄石市医疗器械厂）；SPX-250C型恒温恒湿培养箱（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）；SPX-103型净化工作台（安徽蚌
2、净化设备厂）；漩涡混合器（江苏海门麒麟医用仪器厂）;CSY-II型不锈钢电热恒温水浴锅（北京医疗设备厂）。【种：大肠埃希菌[CMCC⑻44102];金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003];枯草芽胞杆菌[CMCC(B)63501];白色念珠[CMCC(F)98001];黑曲霉菌[CMCC(F)98003]。营养琼脂培养基（中国药品生物制品检定所，批号20050103）;玫瑰红钠琼脂培养基（中国药品生物制品检定所，批号20061109）;胆盐乳糖增菌培养基（中国药品生物制品检定所，批号20070106）;改良马丁琼脂培养基（中国药品生物制品检定所，批号2006091
3、5）;MUG快检试剂（中国药品生物制品检定所，批号20061211）;蛋白豚（上海中洋生物公司东海药厂，批号060512）。其他试剂均为分析纯。pH7.0无菌氯化钠-蛋白豚缓冲溶液，照2005年版《中华人民共和国药典》（一部）配制。试验样品：滋阴明目丸（本院自制，批号070305、070419、070821）。2实验方法与结果2.1菌液制备取经37€培养18〜24h的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌与枯草芽胞杆菌3种菌种，分别接种于10mL营养肉汤中，置37°C培养箱中接着18〜24h,用0.9%灭菌氯化钠溶液稀释至10-5〜10-7约为50〜100cfu,备用。取白色念
4、珠菌接种于10mL改良马丁培养基中，置23〜28°C培养18-24h,用0.9%灭菌氯化钠溶液稀释至10-5〜10-7约为50〜100cfu,备用。取经23〜28€培养1周的黑曲霉改良马丁琼脂斜面培养物，加0.9%无菌氯化钠溶液3〜5mL,将胞子洗脱，用管口带有薄无菌棉花的无菌毛细吸管吸出胞子悬液，置无菌试管内，用0・9%无菌氯化钠溶液稀释为1mL含砲子数50-100cfu的胞子悬液,备用。2.2供试液的制备各取2个最小包装共10g供试品（批号060402）,加入pH7・0无「氯化钠-蛋白豚缓冲液至100niL,振摇，使分散均匀，作为1：10的供试液。2.3细菌、霉
5、菌及酵母菌计数方法的验证试验组：取供试液1讥和50-100cfu试验菌，分别注入平皿中,每株菌平行制备2个平皿。菌液组：测定所加的试验菌数。供试品对照组：取供试液注入平皿中，测定供试品本底菌数。稀释剂对照组：取稀释剂和50〜100cfu试验菌，分别注入平皿中，测定每株平行制备2个平皿。结果见表1。表1回收率测定结果（略）表1结果表明，3次平行试验，滋阴明目丸5株菌的回收率均大于70%,表明滋阴明目丸按常规法进行细菌、霉菌及酵母菌计数，经方法学验证试验成立。2.4大肠菌群的验证试验试验组：取1：10、1:100的供试液1mL,分别接入10mL胆盐乳糖发酵培养基中，分别
6、加入大肠埃希菌混悬液1mL,30〜35€培养24h,观察结果。阴性对照组：除菌液为金黄色葡萄球菌1mL,方法同试验组。阳性对照组：除不加供试液，其他操作同试验组。结果见表2。表2大肠菌群验证试验结果（略）2.5控制菌验证试验试验组：取批号为060402的1：10供试液10n±,加入大肠埃希菌液1mL,接入100niL胆盐乳糖培养基中，35C培养24h;取上述培养物0.2niL,接种至5mLMUG培养基的试管中，35€培养24h;观察后，沿管壁加入数滴靛基质试液，观察结果。阴性菌对照组：除菌液为金黄色葡萄球菌1niL，方法同试验组。阳性对照组：除不加供试液,其他操作同
7、试验组。结果见表3。表3大肠埃希菌验证试验结果（略）滋阴明目丸3次平行试验，试验组都检出大肠埃希菌，阴性菌对照组都未检出金黄色葡萄球菌，表明滋阴明目丸的控制菌检查方法按常规法，经方法学验证试验成立。2.6样品检验结果取滋阴明目丸3批供试品（070305、070419、070821）稀释液按常规法进行细菌、霉菌及酵母菌计数、控制菌检查，经检验符合规定。3结论通过方法学验证试验得出：滋阴明目丸可按常规法进行微生物限度检查；进行霉菌及酵母菌计数和控制菌检查，按培养基稀释法（0.2mL/皿）进行细菌计数。4讨论由于中成药是含有多种成分的复合制剂，作用机理并不十分明确，其
