黄连上清丸微生物限度检查方法学验证论文

《黄连上清丸微生物限度检查方法学验证论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、黄连上清丸微生物限度检查方法学验证论文【摘要】目的：对黄连上清丸微生物限度检查方法进行方法学验证。方法：采用平皿记数法，分组分别使用5种实验菌验证。试验组取供试液加菌液注入培养基中培养。菌液组分别取各实验菌液注入培养基中培养。稀释剂对照组取稀释剂加菌液注入培养基中培养。供试品对照组取供试液注入培养基中培养。通过3次独立的平行试验，分别计算各试验菌每次试验的回收率。采用观察大肠埃希菌、大肠菌群与阴性金黄色葡萄球菌在相同环境下的培养来验证控制菌的检查方法。结果：各试验菌的回收率均高于70%，稀释剂对5种试验菌的回收率均高于70%。结论：采用常规法可以进

2、行本品的微生物限度检查。【关键词】黄连上清丸微生物限度检查方法验证AbstractObjective：ToverifythemicroorganismlimitedinspectingmethodofHuanglianShangqingpill.Method：Platecountingmethodediumoftrialgroup，bacterialliquidgroup.freelethodandpositivestaphybococcusaureusunderthesameenvironment.Result：Therateofeverytra

3、ilbacteriaicroorganismlimitedinspectingofHuanglianShangqingpillcanbeused.Keyicroorganismlimitedinspectingmethod;verification黄连上清丸具有散风清热、泻火止痛的功效，用于治疗风热上攻、肺胃热盛所致的头晕目眩、牙齿疼痛、口舌生疮等。其疗效确切，患者认可，并为中国药典（2005年版）收载。生产企业为了适应市场需要和方便患者服用，申请将大蜜丸改变为水丸。现根据中国药典（2005年版）要求，对非规定灭菌制剂及其原料、辅料进行微生物限度检

4、查，同时进行方法学验证。为确保检验方法的准确性和可靠性，对该品种的微生物限度检查进行了计数方法的验证及控制菌检查方法的验证，现将结果报道如下。1实验材料黄连上清丸由山西万辉制药有限公司生产,.freelL营养肉汤中，35℃~37℃培养18h~24h，取此培养液1mL加0.9%无菌氯化钠溶液9mL，采用10倍递增稀释法，稀释至10-5~10-7，使菌数约为（50~100）cfu/mL。接种白色念珠菌的新鲜培养物至10mL改良马丁液体培养基中，23℃~28℃培养24h~48h，取此培养液1mL加0.9%无菌氯化钠溶液9mL，采用10倍递增稀释法，稀释至

5、10-4~10-5，使菌数约为（50~100）cfu/mL。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂培养基中，23℃~28℃培养5d~7d，加（3~5）mL0.9%无菌氯化钠溶液洗下霉菌孢子，吸出菌液，取1mL菌液加0.9%无菌氯化钠溶液9mL，采用10倍递增稀释法，稀释至10-4~10-6，使菌数约为（50~100）cfu/mL。以上菌液同时各取两份注入培养基培养。采用平皿计数法计数。结果见表1。2.2计数方法的验证2.2.1供试品溶液的制备取供试品10g，加入0.9%无菌氯化钠至100mL，振摇，使成1∶10的供试液。2.2.2黄连上清丸微生物限度

6、检查回收率测定进行3次独立的平行试验，并分别计算各试验菌每次试验的回收率。试验组：取供试液1mL，加入1mL菌液［（50~100）cfu/mL］，注入培养基。菌液组：分别取菌液1mL，注入培养基。供试品对照组：取供试液1mL，注入培养基。稀释剂对照组：取稀释剂（0.9%无菌氯化钠）1mL，加入1mL菌液［（50~100）cfu/mL］，注入培养基。以上各组试验均同时做两份培养，且各试验菌同时进行，采用平皿计数法。2.3控制菌检查方法的验证［2］2.3.1大肠埃希菌［3］2.3.1.1供试液的制备取供试品10g，加入0.9%无菌氯化钠至100mL，振

7、摇均匀，使其成为1∶10的供试液（未经高压蒸汽灭菌）。2.3.1.2验证方法试验组：取供试液10mL，加到胆盐乳糖培养基100mL中，作为供试品管。同法重复1份，加入大肠埃希菌76cfu作为阳性对照管。另取与供试液等量的稀释剂加到胆盐乳糖培养基100mL中作阴性对照管。35℃~37℃培养18h~24h，取上述增菌液0.2mL，加入5mL的4-甲基伞形酮葡糖苷培养基（MUG）试管中，置35℃~37℃培养5h~24h，观察荧光，再加入靛基质试剂观察结果。阴性菌对照组：采用革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌。验证大肠埃希菌取胆盐乳糖培养基100mL，按试验组同法

8、操作，其中加入金黄色葡萄球菌75cfu做阴性对照管。35℃~37℃培养18h~24h，取上述增菌液0.2mL，加入含5mL