酮康唑乳膏微生物限度检查方法的建立

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1、酮康哇乳膏微生物限度检查方法的建立(泰州市食品药品检验所江苏泰州225300)【摘要】目的：探索酮康唑乳膏微生物限度检验方法。方法：按《中国药典》2010年版附录检验。结果：酮康唑乳膏酵母菌检查釆用薄膜过滤法回收率达到70%以上。结论：该方法可用于酮康唑乳膏微生物限度检查。【关键词】酮康唑乳膏；微牛.物限度检查；验证【中图分类号】R927.2【文献标识码】A【文章编号】1007-8231(2016)26-0271-03酮康唑乳膏用于手癬、足癬、体癬、股癬、花斑癬以及皮肤念珠菌病。处方组成为酮康唑20毫克。辅料为：丙二醇、十四酸异丙酯、十六醇、十

2、八醇、失水山梨醇单硬脂酸酯、聚山梨酯60、聚山梨酯80、无水亚硫酸钠和纯化水。木品对皮真菌和(或)酵母菌有一定的抑制作用。木文通过对酮康唑乳膏微生物限度检查方法的验证［2］，探索其微生物限度检查方法。1.材料1.1培养基营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、营养肉汤培养基、肭盐乳糖培养基、改良马丁琼脂培养基、液体改良马丁、十六烷三甲基溴化铵培养基、甘露醇氯化钠琼脂培养基。购自北京陆桥技术股份有限公司。1.2稀释液PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液。1.3样品酮康唑乳膏，规格250ml，批号090801、090802、0908031.4菌种枯草芽孢杆菌

3、CMCC(B)63501、金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003、大肠埃希菌CMCC(B)44102、白色念珠菌CMCC(F)98001、黑曲霉CMCC(F)98003、铜绿假单孢菌CMCC（F）10104。以上菌种均购自江苏省药品检验所，为第三代传代品种。1.5仪器设备净化工作台、恒温培养箱（30〜35°C）、生化培养箱（25〜28°C）、微波炉、康氏振荡仪、匀浆仪（300〜8000r/min）、恒温水浴、电热干燥箱（250〜350°C）、电冰箱、空调、高度蒸汽火菌器、集菌仪、离心器、菌落汁数器、显微镜（1500X）、电子天平（感量O.lg）

4、、免接触自动控制手消毒器1.6玻璃器皿锥形瓶（250〜300ml）、平皿（9cm）、量简（100m）、试管（18×180mm）及塞、吸管（1ml分度0.01,10ml分度0.1）、注射器（20或30ml）、注射针头、载玻片、可折卸滤器及微孔滤膜（0.45μm）均于160°C干热火菌2h或高压蒸汽121°C火菌30min，烘干备用1.7用具一次性无菌衣、帽、U罩、手套、大、小橡皮乳头（放于干净带盖的容器中，并定期用70%〜75%，乙醇溶液浸泡）、接种环（白铱金、环径4〜5mm、长度6〜10cm）、乙醇灯、乙醇棉球及碘伏棉球、火菌

5、剪刀、火菌镊子、不锈钢药匙、试管架、打火机、记号笔、白瓷盘、研钵（陶瓷制、直径10〜12cm）、洗手盆、实验记录纸等。1.方法2.1菌落计数方法的验证2.1.1供试液制备：取样品10mL,加稀释液至lOOmL,混匀，作为1:10供试液。2.1.2菌液制备接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌新鲜培养物至营养闪汤培养基中，培养18〜24小吋；接种白色念珠菌新鲜培养物于改良马丁培养基，培养24〜48小吋。上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至每lml含菌数为50〜lOOcfu的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培

6、养基上，培养5〜7天，加入3〜5ml含0.05%（v/v）的聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（v/v）的聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液稀释至每1ml含孢子数50〜lOOcfu的孢子悬液。2.2常规法2.2.1试验组取1:10的供试液1.0ml、0.5ml、0.2ml及lml含50〜lOOcfu试验菌菌悬液（人肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉）分别注入平皿中，立即倾注营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基分别置于30〜35°C培养72小吋、23〜28°C培120

7、小吋。每株试验菌平行制备两个平皿。2.2.2菌液组每皿注入lml试验菌，测定其菌数，每株试验菌平行制备两个平皿。2.2.3供试品对照组取1:10的供试液1.0ml、0.5ml、0.2ml置平皿中，立即顷注营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基，测定本底菌数。平行制备两个平皿。结果见下表1。表1酮康唑乳膏-常规法（回收率）由表1可看上述方法表明金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的冋收率未达到70%以上。黑曲霉、白色念珠菌的回收率也未达标，必须重建细菌、霉菌和酵母菌的计数方法验证。2.2.4稀释剂对照组取0.9%无菌NaCI溶液各lml,分别注入

8、两个平皿中，每个平皿加入50〜100CFU试验菌，按实验组的供试液制备方法和菌落计数方法测定其菌数。2.2.5结果判断对照组的菌回收率应不低于70%。