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1、清开灵注射液细菌内毒素检查探究摘要：目的：建立清开灵注射液细菌内毒素检查法。方法:采用《中国药典》2005年版附录细菌内毒素检查法。结果：清开灵注射液经30倍稀释后，用灵敏度为0.25EU/mL的鲨试剂检查细菌内毒素无干扰因素的影响。结论：清开灵注射液可应用鲨试剂进行细菌内毒素检查。❷关键词：清开灵注射液；细菌内毒素；干扰试验❷中图分类号：R285.1文献标识码：A文章编号：1673-7717(2007)04-0671-03清开灵注射液为临床常用中药注射剂，是中国药典2005年版所收载的品种。其功效为清热解
2、毒、化痰通络、醒神开窍；可用于热病神昏，中风偏瘫，神志不清；也可用于治疗急慢性肝炎、乙型肝炎、上呼吸道感染、肺炎、高烧等。其质量标准中规定以家兔法检查热原［1］。已有清开灵注射液细菌内毒素检查法的相关报道，但有的研究仅选择一或二个厂家生产的清开灵注射液［1-4］,有的研究仅选择一个厂家生产的鲨试剂［2,4］。此外，随着中药现代化进程的加快,有的生产厂家已采用了新的清开灵注射液生产工艺［5］。笔者认为，应参照《中国药典》2005年版“细菌内毒素检查法”、“细菌内毒素检查法应用指导原则”，对清开灵注射液应用鲨试
3、剂进行细菌内毒素检查的可行性进行研究。现报道如下。❷1材料与试剂❷1.1清开灵注射液①广州白云山明兴制药有限公司，规格:10mL,批号:050805；050815；050926。②河北神威药业有限公司,规格：10mL,批号:05092011；0509120111；05103111o③北京中医药大学药厂，规格：10mL,批号：512411A；512201Ao④吉林省集安益盛药业股份有限公司；规格：10mL,批号：0509174；0601037。❷1.2鲨试剂(TAL)①湛江安度斯生物有限公司；规格：0.ImL
4、,批号：0412010,灵敏度：0.25EU/mL；规格：0.ImL,批号：0509160,灵敏度：0.125EU/mL；规格:0.ImL,批号:0410270,灵敏度：0.125EU/mLo②厦门鲨试剂厂,规格:0.ImL,批号：051033,灵敏度：0.25EU/mLo③湛江博康海洋生物有限公司，规格：O.lmL,批号：0603150,灵敏度：0.25EU/mLo❷1.3细菌内毒素工作标准品(CSE)批号：2003-3(150EU/Amp),中国药品生物制品检定所生产。❷1.4细菌内毒素检查用水(WBE
5、T)批号：2005-120,中国药品生物制品检定所生产。❷2限值的确定❷公式：L=K/MoK为5EU/(kg•；h)M为40mL/(60kg•；h)(清开灵注射液说明书：重症感染者静脉滴注1日20〜40mL,以10%葡萄糖注射液200mL或氯化钠注射液lOOmL稀释后使用)，L=7.5EU/mLo❷3实验❷3.1鲨试剂灵敏度复核实验按照中国药典2005年版二部附录细菌内毒素检查法规定，进行鲨试剂的标示灵敏度复核，结果见表1所示。❷5批鲨试剂经用细菌内毒素工作标准品检查入c与入一致，结果均
6、符合规定。❷3.2干扰实验预实验①丹参有效稀释倍数(MVD)的计算:公式MVD=L/入。其中L为清开灵的细菌内毒素限值7.5EU/mL,入为鲨试剂标示灵敏度，目前市售鲨试剂灵敏度入通常在0.5〜0.03EU/mL则清开灵的对应有效稀释倍数为:②实验操作：将清开灵注射液用细菌内毒素检查用水分别5、7.5、10、15、20、30、40、80倍稀释，将此系列浓度溶液记为NPCo令同时在上述清开灵注射液5、7.5、10、15、20、30、40倍稀释液中加入细菌内毒素标准溶液，使每一浓度的试验液中均含有2入浓度的细菌
7、内毒素，记此系列溶液为PPC。❷取灵敏度为0.25EU/mL和0.125EU/mL的两个不同厂家的鲨试剂，分别与上述PPC和NPC进行反应，每一浓度重复两管，并设阳性和阴性对照。❷由以上预干扰实验结果可以初步了解：两个厂家鲨试剂对清开灵的细菌内毒素的试验结果均在15倍以下稀释时无抑制干扰。❷3.3正式干扰实验为了最终确认是否存在抑制因素的影响，进行以下正式干扰试验。❷取清开灵注射液用细菌内毒素检查水分别进行稀释，使其最终干扰试验为30倍稀释液，按中国药典2005年版二部附录中的细菌内毒素检查供试品干扰实验项
8、进行实验，结果见表3-1、3-2、3-3。❷表3-1样品溶液（30倍稀释）的干扰实验（厦门鲨试剂厂lotNo.051033,X=0.25Eu/mL）样品内毒素浓度EU/mL）4样品细菌内毒素检查❷按中国药典细菌内毒素检查法，使用两批不同厂家的鲨试剂分别对样品进行细菌内毒素检查，并同时设立样品的自身阳性对照管，结果见表4-1、4-2o❷表4T样品细菌内毒素检查❷（TALLotNo.0410270,入=0.125EU
