SIRT2基因沉默后对肝癌细胞增殖的影响_冉龙宽

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1、第36卷第20期第三军医大学学报Vol．36，No．2020982014年10月30日JThirdMilMedUnivOct．302014论著文章编号:1000-5404(2014)20-2098-05SIＲT2基因沉默后对肝癌细胞增殖的影响冉龙宽，宋春丽，李宛蔚，任吉华，陈祥，陶娜娜，陈娟(400016重庆，重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室)［摘要］目的探讨沉默信息调节因子2相关酶2(silentinformationregulator2relatedenzyme2，SIＲT2)基因沉默对

2、肝癌细胞增殖的影响及分子机制。方法利用慢病毒介导的shＲNA干扰技术，靶向沉默SIＲT2基因的表达;Westernblot检测SIＲT2基因沉默效果及SIＲT2沉默后β-catenin蛋白的表达变化;流式细胞计数检测SIＲT2基因沉默后肝癌细胞周期的变化，CCK-8法检测SIＲT2基因沉默对肝癌细胞增殖的影响，台盼蓝计数检测SIＲT2基因沉默及过表达β-catenin后，SIＲT2基因沉默对肝癌细胞增殖的影响;BrdU实验检测SIＲT2基因沉默对肝癌细胞DNA合成的影响;平板集落实验检测SIＲT2沉默对肝癌

3、细胞克隆形成能力的影响。结果SIＲT2shＲNA靶向沉默显著抑制肝癌细胞SIＲT2的表达水平，shＲNA沉默组肝癌细胞PLC-5的增殖能力较对照组分别下降48．3%(shSIＲT2-1)、55．6%(shSIＲT2-2)(P＜0.01);SIＲT2基因沉默后，肝癌细胞出现G1期阻滞，β-catenin蛋白表达水平下降;过表达β-catenin后SIＲT2基因沉默组较对照组肝癌细胞增殖分别升高了89%(shSIＲT2-1)、75%(shSIＲT2-2)(P＜0.01)。结论SIＲT2沉默可能通过调节β-cat

4、enin信号通路来影响肝癌细胞增殖。［关键词］SIＲT2;肝癌;增殖［中图法分类号］Ｒ394．3;Ｒ730．23;Ｒ735．7［文献标志码］AEffectofSIＲT2silencingonproliferationofhepatocellularcarcinomacellsＲanLongkuan，SongChunli，LiWanyu，ＲenJihua，ChenXiang，TaoNana，ChenJuan(KeyLaboratoryofMolecularBiologyonInfectionDiseaseso

5、fMinistryofEducation，ChongqingMedicalUniversity，Chongqing，400016，China)［Abstract］ObjectiveToilluminatethefunctionofsilentinformationregulator2relatedenzyme2(SIＲT2)ontheproliferationofhepatocellularcarcinomacells(HCCs)．MethodsTheexpressionofSIＲT2wassilenced

6、bylentivirus-mediatedshorthairpinＲNA(shＲNA)interference．SIＲT2proteinlevelwasmeasuredbyWesternblotting．Theproteinlevelofβ-cateninwasanalyzedbyWesternblotting．Cellcyclewasmeasuredbyflowcytometry．TheeffectofSIＲT2silencingoncellproliferationofHCCswasdetermined

7、bytrypanblueexclusionassayandCellCountingKit-8(CCK-8)．DNAsynthesiswasdetectedbythebromodeoxyuridine(BrdU)assay．ThecloneformationofHCCswasobservedbycolonyformationassay．ＲesultsLentivirus-mediatedshＲNAsignificantlydown-regulatedtheSIＲT2expressionlevelinHCCs．

8、KnockdownofSIＲT2inhepatocarcinomacelllinePLC-5decreasedcellproliferationby48．3%and55．6%respectivelyforshSIＲT2-1andshSIＲT2-2(P＜0.01)．KnockdownofSIＲT2inducedG1phasearrestinPLC-5cellsanddecreasedtheexpressionofβ