[经典]生化试剂对胆汁酸测定的交叉污染及防范措施

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1、[经典]生化试剂对胆汁酸测定的交叉污染及防范措施生化试剂对胆汁酸测定的交叉污染及防范措施【摘要】目的探讨生化试剂对胆汁酸(TBA)测定的交叉污染及防范措施。方法①采用放大的方法，将总胆汁酸作为观察项目，其他常规生化项目ALT、CREA、GGT、AST、TP、UA、ALB、TBIL、DBIL、TG、CHOL、HDL、BUN、APOA、APOB、GLU、FRUC作为干扰项目，筛查并确认对总胆汁酸测定有明显干扰的项目;②设定特殊清洗程序来降低干扰。结果本实验发现尿酸、三酰甘油、总胆固醇对总胆汁酸测定有明显的正干扰。设置加强水

2、冲洗试剂针程序可有效的去除尿酸的干扰；设置在总胆汁酸项目加试剂前对仪器固定比色杯自动清洗后再进行特殊清洗，可消除因试剂携带污染对总汁酸测定的干扰。结论全自动生化分析仪测定总胆汁酸存在项B间的交叉污染，设置特殊清洗方式可有效地消除因试剂携带污染对TBA测定的干扰。【关键词】生化试剂；胆汁酸；总胆固醇；交叉污染全自动生化分析仪具有微量、快速、多项、准确、重复性好等特点。随着全自动生化分析仪的广泛应用，其测定过程中存在的交叉污染问题也受到关注。在检测标本中的总胆酸的含量时，通过调整项目通道后仍发现胆汁酸单项特别高，在复查时结

3、果又正常的现象。胆汁酸在肝服疾病、新生儿黄疸、孕妇肝内胆•汁淤积症、冠心病等方面都是及其重要的检测指标^[l]o所以，笔者就胆汁酸结果的不稳定性及防范措施进行实验室观察，现报告如下。1材料1.1仪器与试剂日立7170型全自动生化分析仪。ALT、CREA、GGT、AST、TP、UA、ALB、TG、CHOL、GLU、FRUC市上海合富公司提供。APOA、APOB±海北加公司提供，TBIL、DBIL由上海利德曼公司提供，TBA由烟台奥斯邦公司提供。1.2混合血清采用Randox公司的质控血清。1.3清洗液

4、日立公司的碱性清洗液HIALKAU-Do2方法2.1胆汁酸检测原理如图lo2.2可疑项目的筛查将常规生化项目ALT、CREA、GGT、AST、TP、UA、ALB、TBIL、DBIL、TG、CHOL、HDL、BUN、APOA、APOB、GLU、FRUC及蒸惚水作为待测样木來测定总胆汁酸，筛查出对TBA有明显干扰的项目。1.3可疑项目的确认将混合血清连续测定10次TBA,计算其均值和标准差。取均值作为相应项冃的靶值取均值，然后再按如下顺序测定；如先测GGT再测TP,即反映GGT试剂对TP测定的影响，如此反复10次。计算其均

5、值和标准差，与和应的靶值比较。其他组合也同样按照上述方法进行，然后做统计学分析。2.4交叉污染的排除2.4.1设定蒸馅水加强冲洗程序在日立生化仪上设置清除试剂间交叉干扰的程序，在试剂针从施干扰项转向TBA项目吋再对试剂针用蒸馆水加强冲洗1次。重复2・3操作，观察交叉污染是否依然存在。2.4.2设定比色杯清洗程序将用加强蒸憾水清洗后交叉污染依然存在的组合列出，在测定完某个对另一个项目将造成污染的项目后，在特殊清洗程序中设定试剂针1、试剂针2分别向该使用过的杯子注入清洗剂的程序。重复2.3操作，观察交叉污染是否依然存在。2

6、.4.3统计分析使用SPSSS10.0统计软件，测定值与靶值组进行配对样木t检验，P〈0・05差异有统计学意义。3结果2.1筛查实验通过实验发现，UA、TG、TC对TBA疑有止干扰，总胆红素和肌酹可能对总胆汁酸有干扰，见表1。1.2可疑项冃的确认通过实验发现，UA、TG、TC对TBA有明显的正干扰，而总胆红素和肌酹的可能干扰则可被试剂针的常规清洗程序排除（见表2）。1.3设定蒸帼水加强冲洗程序Z后，尿酸对总胆汁酸的交叉污染基木排除，测定值与靶值比较，结果差异无统计学意义（P>0・05）o但总胆固醇和三酰甘油对总胆汁酸的

7、污染依然存在（见表3）o1.4设定固定比色杯清洗程序后。各组合的交叉污染基本排除。测定值组与靶值组比较，结果差异无统计学意义（P>0・05）（见表4）。3讨论胆汁酸是由肝脏分解代谢的，能反映肝实质损伤。所以胆汁酸的结果影响到疾病的诊断治疗和预后。本实验室采用循环酶法测定胆汁酸的含量，通过不断的循环使微量的胆汁酸信号被扩增（图1）,扩增的量决定于循环次数，这种方法不但可以提高检测的灵敏度，而且也大大减少了共存物质的干扰。多通道生化分析仪的试剂加样机构需接触各种试剂成分，因此当试剂针、搅拌针和固定比色杯清洗不完全或清洗液的

8、效率低时，残留试剂或反应产物污染试剂针、搅拌针和固定比色杯，从而会可能导致相邻检测项冃结果的不稳定性。胆汁酸结果的不稳定性，荟萃资料表明，有3个主要原因:第一，试剂成分屮含有某种被污染的项目；第二，试剂中含有下一个测试所要测定底物或含有的某种试剂成分，与下一反应所测定的底物有作用，因而直接影响下一反应测定的结果;第三，该试剂所引导