猪感染牛病毒性腹泻病毒的诊断

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1、猪感染牛病毒性腹泻病毒的诊断牛病毒性腹泻病毒(bovineviraldiarrheavirus,BVDV)与猪瘟病毒(classicalswinefevervirus,CSFV)同属于黄病毒科瘟病毒属,二者在基因结构和抗原性上均有较高的同源性，存在交叉反应。CSFV和BVDV均可感染猪，猪感染BVDV后可导致母猪繁殖障碍以及仔猪腹泻、消瘦、败血症等类似慢性猪瘟的临床特征。2015年10月广西壮族自治区某猪场仔猪陆续出现消瘦、贫血、生长迟缓以及心外膜、肾、淋巴结有出血点等类似猪瘟的临床特征,猪瘟疫苗紧急免疫接种未能有效控制该疫病。为确定该疫病发生的致

2、病原，本研究对其进行了BVDV感染的临床和实验室诊断,现介绍如下。1.材料与方法1.1临床诊断询问并调查该猪场的发病情况，观察临床症状和病理变化。1.2实验室诊断1.2.1病料样品的采集与处理采集病死猪的脾脏、淋巴结等组织病料，将其与5倍体积灭菌生理盐水充分混合、碾磨、冻融后，12000r/min离心lOmin,吸取上清液，即得待检病料样品。1.2.2引物设计与合成参照李晶梅等…的方法合成BVDV、CSFV的鉴别检测引物。1.2.3病毒基因组RNA的提取按照病毒基因组RNA提取试剂盒的操作方法提取病料样品的基因组RNAo1.2.4RT-PCR扩增与

3、鉴定以提取的基因组RNA为模板，参照李晶梅等的方法进行RT-PCR扩增。扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测后，回收纯化，连接至PMD18-T载体，构建重组质粒，送宝生物工程（大连）有限公司测序，将测序结果与GenBank中登录的序列进行同源性比较分析。2•结果与分析2.1临床诊断结果211发病情况仔猪陆续发病，虽有死亡但死亡率较低，用青霉素.链霉素等药物治疗无效，用猪瘟弱毒疫苗紧急免疫接种无效。2.1.2临床症状仔猪厌食、精神沉郁、被毛粗乱、消瘦、腹泻.贫血、生长迟缓，有个别的震颤、站立不稳。II)213病理变化剖检病死仔猪可见心外膜、肾脏及全身淋巴结均

4、有大量出血点，脾脏边缘有锯齿状梗死灶，胃、结肠、盲肠黏膜溃疡，具有纽扣状溃疡灶。2.2实验室诊断结果2.2.1RT-PCR检测结果病料样品经CSFV和BVDVRT-PCR鉴别检测方法扩增后，在153bp处具有特异性片段，其大小与李晶梅等的报道相符，表明BVDV阳性，CSFV阴性。2.2.2核酸序列鉴定结果T-PCR阳性扩增产物的序列鉴定结果显示，与GenBank中登录号为AJ585412的BVDV毒株序列同源性达100.0%o2.3综合诊断结果经临床诊断和实验室诊断综合判定该猪场此次疫病由BVDV感染所致。3•讨论近几年，我国猪群中BVDV的发生与

5、流行日益增多，戴爱玲等对闽西地区762份猪血清样品的检测阳性率为28.6%,徐磊等对福建省458份临床样品的检测阳性率为10.04%,本病例再次表明广西壮族自治区某猪场中存在BVDV的感染，可见BVDV在猪群中的流行已十分严重。且本研究中发现猪瘟疫苗免疫后,CSFV的核酸检测仍为阴性，表明BVDV可在一定程度上影响CSFV抗体水平，干扰猪瘟疫苗的免疫效果，造成猪瘟疫苗免疫失败。故应加强对猪感染BVDV的重视，加强猪群中BVDV的诊断与监测，及时发现和淘汰BVDV感染猪，保障养猪业稳定发展。