汉滩病毒G1S07嵌合基因重组腺病毒的构建及鉴定

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1、.206-免疫学杂志第22卷第2期2006年3月IMMUNOLOGICALJOURNALVol・22No・2Mar.2006［文章编号］100X8861(2006)024)206X)4汉滩病毒G1S0.7嵌合基因重组腺病毒的构建及鉴定张芳琳，刘勇，于澜，胡刚，吴兴安，史梦远，白文涛，王海涛，徐志凯气第四军医大学微生物学教研室，西安710032)［M要］目的在本室前期工作的基础上构建汉滩病iSM基因G1片段与S基因0.7kb片段嵌合基因的St组腺病灌。方法构確含有汉滩病毒G190.7嵌合基因的转移载体pShuttle-GlSO

2、.7,然后通过特异性的酔切将嵌合基因与腺病灌DNA相连，电转化E.ZJM109,获得重组腺病ftAdenoGlS0.7DNA,转染HEK293细胞得到巫组腺病毎。进一步对Bt组腺病竜的滴度和表达产物进行鉴定。结果构建的含G1S0.7嵌合基因的It组腺病毒，滴度可达1013-1015PFU/L;该巫组腺病奉感染Ven>E6细胞后，表达出可被抗汉滩病毒核蛋白及糖蛋白G1的待异性单抗(mAb)所识别的融合蛋白。结论利用腺病毒表达系统，成功地表达同时具有核蛋白及糖蛋白G1生物学活性的融合蛋白，为进一步研究其免疫学待性奠定了基础。［关

3、■词］汉滩病毒；嵌合基因；重组腺病毒［中圈分类号］Q78［文献标识码］AConstructionandidentificationofrecombinantadenoviruscontainingchimericgeneG1S0.7ofHantaanvirus•ZHANGFang-lin,LIUYong,YULan,HUGang,WUXing-anfSHIMeng-yuan,BAIWen-tao,WANGHai-tao,XUZhi-kai(DepartmentofMicrobiology,SchoolofBasicMedic

4、ine,FourthMilitaryMedicalUniversity,Xi*an710032,China)[Abstract]ObjectiveToexpressthechimencgenecontainingtheG1fragmentofMsegmentandthe0.7kbfragmentofSsegmentfromHantaanvirusinadenovimsexpressionsystem.MethodsHierecombinantadenovirustransfervectorpShuttle-GlS0.7was

5、constructed.ThenthechimencgenewasinsertedintoadenovineDNA.AftertransfectionofHEK293cells9therecombinantadenoviruswasobtainedanditstiterwasdetennined.Theexpressedproductwasdetectedbyindirectimmunofluorescenceassay(IFA).ResultsHierecombinantadenovimscontainingthechim

6、ericgeneG1S0.7wasconstmctedsuccessfullyanditstiterwasaboutIO13-1013PFU/L.Afterinfectionwiththerecombinantadenovirus,Vero-E6cellscouldexpressfusionprotein,whichcouldberecognizedbyboththehantaanvimsNP-specificmAbandglycoproteinGl-specificmAb.CoodusionG1S0.7withbiol

7、ogicalactivitywasexpressedinadenovimsexpressionsystemsuccessfully,whichlaysafoundationforfurtherresearchonitsimmunologicalcharacteristic.[Keywords]Hantaanvine;Chimericgene;Recombinantadenovirus汉滩病毒(hantaanvirus,HINV)可引起肾综合征岀血热(hemorrhagicfeverwithrenalsyndrome,HFRS

8、)O该病是一种急性病毒性传染病，在我国流行范围广、危害大。本室前期将编码HINVG1糖蛋白的M基因片段与编码核蛋白(NP)氨基端aal-274的S基因片段(S0.7)进行了拼接，利用原核及杆状病毒表达系统表达了嵌合基因G1S0.7,并对其免疫〔收稿日期］2005-02-25让修回日期］20