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1、大蒜多糖中单糖组分毛细管电泳探究作者：马晓丽，孟磊，孙莲，李新霞，吕成军【摘要】目的建立高效毛细管电泳法（HPCE）分析大蒜多糖中的单糖组成及摩尔比。方法大蒜多糖样品经2mol/L硫酸降解为单糖后，经1-苯基-3-甲基-5-毗哩咻酮（PMP）衍生化，用毛细管区带电泳（CZE）法测定单糖组成。结果大蒜多糖中葡萄糖（Glc）、半乳糖醛酸（GalUA）、鼠李糖（Rha）、甘露糖（Man）、阿拉伯糖（Arab）、葡萄糖醛酸（GlcUA）、半乳糖（Gal）的摩尔比为18.4：6.99：4.21：4.38：3.15：7.21:4.99o结论该方法灵敏度高，结果准确可靠，可用于大蒜多糖的单糖组成
2、测定及质量控制。【关键词】大蒜多糖；衍生化；1-苯基-3-甲基-5-毗哇咻酮；毛细管电泳法大蒜（Alliumsativum）营养丰富，是日常生活中常用的香辛蔬菜和调味佳品，而且具有很强的防病治病保健功能[l]o大蒜多糖为大蒜中一类含量较高的活性组分，药理研究证明大蒜多糖具有抗氧化、抗病毒、保护心肌、防止心肌纤维化等多种重要的生物活性[2,3],虽然大量文献报道了大蒜多糖的提取分离及药理作用，但关于大蒜多糖的单糖组分研究未见报道。高效毛细管电泳法［4,5］是近年发展起来的一种具有高效、灵敏和低耗的分析方法，已引起药物分析界的广泛重视。本实验首次采用柱前衍生化方法，用毛细管电泳法研究大
3、蒜多糖的单糖组成，以期为大蒜资源的开发和利用提供基础依据。1仪器与试药BeckmanP/ACETMMDQ型高效毛细管电泳仪(Beckman公司，美国)，二极管阵列检测器，石英毛细管柱(58.5cmX75um,有效长度48.5cm,河北永年)；FE20-pH计(METTLERTOLEDO公司)；XS205电子天平(METTLERTOLEDO)o葡萄糖(glucose)、甘露糖(mannose)、半乳糖(galactose)>鼠李糖(rhamnose)、阿拉伯糖(arabonose)(分析纯，上海试剂二厂)；葡萄糖醛酸(glucuronic)和半乳糖醛酸(galacturonicaci
4、d,分析纯，Sigma公司)；大蒜多糖由新疆埃乐欣药业分离纯化。1-苯基-3-甲基-5-毗哇咻酮(PMP)(分析纯，上海试剂二厂)；乙月青，甲醇，色谱纯；硫酸(H2S04),盐酸(HC1),氢氧化钠(NaOH)(分析纯，西安化学试剂厂)；水为去离子水。2方法与结果2.1电泳条件石英毛细管柱(58.5cmX75um,有效长度48.5cm)；运行缓冲液：75mmol-L-1硼砂溶液(pH=10.50)；柱温25°C；电压：15kV；压力进样0.5PaX20s；检测波长245nm。清洗程序：第1次进样前分别以甲醇、双蒸水、0.1mol/L盐酸、双蒸水、0.1mol/LNaOH＞双蒸水、缓
5、冲溶液冲洗毛细管20psiX3min；每变换1次电泳缓冲液，均用缓冲液平衡至电流平稳(10min)后才能进样测量。样品及缓冲液均在4。(2储存，在使用前用0.45um微孔滤膜滤过，且临用前超声脱气处理。2.2多糖的水解精确称取大蒜多糖20.0mg,置于10ml具塞试管内，加入2mol•L-1的H2S04溶液2.0ml,于10CTC水浴中水解8h,得水解样品溶液。用4mol•L-1氢氧化钠水溶液中和至pH7.0,并以纯化水稀释到5.0ml,离心，吸取上清液，得多糖水解样品。2.3衍生物的制备2.3.1标准单糖混合液的配制分别精密称取甘露糖(Man)0.0018g及半乳糖(Gal)0.
6、0036g,鼠李糖(Rha)0.0036g,葡萄糖(Glc)0.0039g,葡萄糖醛酸(GlcUA)0.0039g,半乳糖醛酸(GalUA)0.0042g,阿拉伯糖(Arab)0.0030g,置10ml量瓶中，加水溶解并定容至刻度，摇匀，即得。2.3.2标准单糖混合液的衍生精密吸取单糖混合液50n1,于具塞试管中，分别加入0.3mol・L-1NaOII50u1和0.5mol•L-lPMP甲醇溶液50u1,涡旋混合30s,置于70°C水浴反应30min,冷却至室温，加入0.3mol・L-lHC150卩1进行中和，加入去离子水100卩1稀释混匀，然后加入1ml氯仿涡漩混匀30s,静置5
7、min,上层水相再重复萃取2次，经0.45uni微孔滤膜滤过，进样分析。2.3.3多糖水解样品的衍生将水解后的大蒜多糖按“2.3.2”项下方法进行衍生化处理，进样时间20So结果见图1〜2。2.4线性关系考察取适量标准品混合液按“2.3.2”项方法进行衍生，经0.45nm微孔滤膜滤过，用过滤过的去离子水1：1稀释，分别进样5.0,10.0,15.0,20.0,25.0s,记录色谱图，进行线性回归。结果见表1。表17种单糖的标准曲线(略)2.5进样精密度考察考察所建立方
