枸杞多糖结构及其单糖组分的分析研究

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1、‘王誊誓‘雷口!塑望垒塑!坚竺!盟!垒!!型塑旦!!墨幽枸杞多糖结构及其单糖组分的分析研究何晋浙，胡飞华，孙培龙，张安强，邵平(浙江工业大学生物与环境工程学院食品系，浙江杭州，310014)摘要枸杞经乙醚脱脂和Sevag法脱蛋白后，用热水提取并用乙醇沉淀多糖，采用紫外光谱、红外光谱、气相色谱和FID检测器对枸杞多糖结构和功效成分单糖进行光谱分析和气相色谱分析。结果表明：枸杞多糖属于蛋白多糖，构杞多糖存在有官能团如一0H，C—o—C，C=0，一NHz等，其糖苷键存在p_型糖苷键和口．构型的吡喃糖和呋喃糖。多耱为杂多糖，粗多糖得宰

2、为2．04％，采用DB一1701毛细管柱对乙酰化后的单糖能进行很好的色谱分离，其单糖组分至少合有8种以上的单糖：鼠李糖、岩藻糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖等，其中含量较多的是阿拉伯糖、葡萄糖和半乳糖，它们的摩尔比1．956tO．835：O．629，其余的单糖含量比较低。关键词构杞多糖，多糖结构，单糖枸杞是我国传统名贵中药也是民间常见的食品配料，尤其从枸杞中提取的枸杞多糖(LBP)由于其具有多种独特的生理活性，近年来引起人们极大的关注[1’2]。一般多糖是醛糖和(或)酮糖通过糖苷键连接在一起的聚合物，是生物体内普遍存

3、在的一类生物大分子。由于其对正常细胞无毒副作用，能够激活免疫细胞、提高机体免疫功能，并具有抗肿瘤、抗氧化、抗心血管疾病、抗衰老、调节机体免疫力、降血脂、降血糖、促进核酸与蛋白质的生物合成等作用[3~6]。但由于多糖类物质的种类很多，性质各不相同，所起功效作用各异，其报道的I临床药理和适应症各有异同，因此为了进一步研究枸杞多糖中的化学结构和生物活性组分，有必要对其单糖组成、结构及构效关系进行研究。目前对枸杞多糖的分离、提取纯化、光谱结构分析，单糖组成的分析研究报道不是很多，本文主要对枸杞多糖进行分离纯化，以及进行多糖结构的紫外和

4、红外光谱研究，并采用气相色谱法对多糖的单糖组成进行了分析，为枸杞多糖的的功效组分单糖的结构与构效关系研究及其综合利用提供参考。1材料与方法1．1样品与试剂枸杞购自于杭州药店，来自于宁夏品种。单糖标准品为分析纯生化试剂：D葡萄糖，D阿拉伯糖，D半乳糖，D甘露糖，L-山梨糖、，L-鼠李糖，D木糖(均购自上海源聚科技有限公司)，L-岩藻糖(为进口试剂)。衍生化试剂与样品溶剂为醋酐，硼氢化钠第一作者：学士，高级实验师。收稿日期：2007—12—1848I兰Q塑!里!：塑丝鱼：曼!!旦!望!呈箜2(NaBH。)，甲醇，无水硫酸钠，氯仿均

5、为国产分析纯试剂。1．2仪器与气相色谱条件UV2450紫外分光光度计(日本，岛津)；Nico—let6700型红外光谱仪(美国尼高力公司)；美国Agi—lent6890N气相色谱仪，毛细管色谱柱：DB一1701(主要成分：14％甲基硅氧烷，规格：30m×320弘m×0．25“m)，检测器为火焰检测器(FID)。1．3枸杞多糖的提取纯化1．3．1多糖的提取称取200g枸杞子并粉碎，经70℃真空干燥箱烘干，称取100g干燥枸杞粉末，于索氏回流装置中用乙醚回流脱脂2次，残渣风干后，加水500mL于90℃水浴上浸提3次(3x500mL

6、)，浸提取时间每次为4～5h，过滤后合并3次浸提液，静置12h，离心取其上清液，再真空浓缩一倍体积。用Sevag法脱蛋白后，用乙醇调至体积分数为80％，搅拌，在冰箱中静置24h(5℃)，得脱蛋白粗多糖沉淀物，滤液再以95％乙醇沉淀提取。粗多糖于60℃真空干燥箱烘干，置于干燥器中备用。1．3．2Sevag法脱蛋白按枸杞多糖水溶液20％体积加入Sevag试剂[y(CHCl。)：y(正丁醇)=3。1]，置水浴振荡器振荡12h，使蛋白质充分沉淀，离心(3000r／min)分离，去除蛋白质，倾出上清液，流水透析48h，备用。1．4单糖的

7、乙酰化1．4．1标准单糖的乙酰化精密称取配置等浓度(10mmol／L)量的葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖、岩藻糖、鼠李糖、甘露糖、木糖和山梨糖，分别溶于5mL蒸馏水中，加入50～60mg硼氢化钠(NaBH．)，于室温下还原3h，然后用冰醋酸中和过量的NaBH。，加入少量甲醇，减压浓缩蒸干，重复4～5次，然后真空干燥12h。再加入18mL醋酐，100℃反应1h，然后加入少量甲苯，减压浓缩蒸干。将乙酰化后的产物用氯仿溶解后转移至分液漏斗，加人少量蒸馏水充分振荡后，除去上层水溶液，如此反复2～4次。CHCl。层以适量无水硫酸钠干燥，定容至

8、10mL，供GC分析。1．4．2混合标准品的配制分别量取乙酰化后的标准单糖溶液各1mL组成混合标准品，供GC分析。1．4．3枸杞多糖的乙酰化处理称取10mg枸杞粗多糖样品，放人试管中，加入2mol／L三氟乙酸(TFA)10mL在110℃水解2h。将水解液低于40℃减压蒸干，然