大蒜多糖中单糖组分的毛细管电泳研究

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1、大蒜多糖中单糖组分的毛细管电泳研究作者：马晓丽，孟磊，孙莲，李新霞，吕成军【摘要】　　目的建立高效毛细管电泳法（HPCE）分析大蒜多糖中的单糖组成及摩尔比。方法大蒜多糖样品经2mol/L硫酸降解为单糖后，经1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生化，用毛细管区带电泳(CZE)法测定单糖组成。结果大蒜多糖中葡萄糖（Glc）、半乳糖醛酸（GalUA）、鼠李糖（Rha）、甘露糖（Man）、阿拉伯糖（Arab）、葡萄糖醛酸（GlcUA）、半乳糖（Gal）的摩尔比为18.4∶6.99∶4.21∶4.38∶3.15∶7.21∶4

2、.99。结论该方法灵敏度高，结果准确可靠，可用于大蒜多糖的单糖组成测定及质量控制。【关键词】大蒜多糖；衍生化；1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮；毛细管电泳法大蒜(Alliumsativum)营养丰富，是日常生活中常用的香辛蔬菜和调味佳品，而且具有很强的防病治病保健功能［1］。大蒜多糖为大蒜中一类含量较高的活性组分，药理研究证明大蒜多糖具有抗氧化、抗病毒、保护心肌、防止心肌纤维化等多种重要的生物活性［2，3］，虽然大量文献报道了大蒜多糖的提取分离及药理作用，但关于大蒜多糖的单糖组分研究未见报道。7高效毛细管电泳法［4，5］是

3、近年发展起来的一种具有高效、灵敏和低耗的分析方法，已引起药物分析界的广泛重视。本实验首次采用柱前衍生化方法，用毛细管电泳法研究大蒜多糖的单糖组成，以期为大蒜资源的开发和利用提供基础依据。　　1仪器与试药　　BeckmanP/ACETMMDQ型高效毛细管电泳仪（Beckman公司，美国），二极管阵列检测器，石英毛细管柱（58.5cm×75μm，有效长度48.5cm，河北永年）；FE20-pH计（METTLERTOLEDO公司）；XS205电子天平（METTLERTOLEDO）。葡萄糖(glucose)、甘露糖(mannose

4、)、半乳糖(galactose)、鼠李糖(rhamnose)、阿拉伯糖(arabonose)(分析纯，上海试剂二厂)；葡萄糖醛酸(glucuronic)和半乳糖醛酸(galacturonicacid，分析纯，Sigma公司)；大蒜多糖由新疆埃乐欣药业分离纯化。　　1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)（分析纯，上海试剂二厂）；乙腈，甲醇，色谱纯；硫酸（H2SO4），盐酸（HCl），氢氧化钠（NaOH）(分析纯，西安化学试剂厂)；水为去离子水。　　2方法与结果7　　2.1电泳条件石英毛细管柱（58.5cm×75μm，有效

5、长度48.5cm）；运行缓冲液：75mmol·L-1硼砂溶液（pH=10.50）；柱温25℃；电压：15kV；压力进样0.5Pa×20s；检测波长245nm。清洗程序：第1次进样前分别以甲醇、双蒸水、0.1mol/L盐酸、双蒸水、0.1mol/LNaOH、双蒸水、缓冲溶液冲洗毛细管20psi×3min；每变换1次电泳缓冲液，均用缓冲液平衡至电流平稳(10min)后才能进样测量。样品及缓冲液均在4℃储存，在使用前用0.45μm微孔滤膜滤过，且临用前超声脱气处理。　　2.2多糖的水解精确称取大蒜多糖20.0mg，置于10ml具

6、塞试管内，加入2mol·L-1的H2SO4溶液2.0ml，于100℃水浴中水解8h，得水解样品溶液。用4mol·L-1氢氧化钠水溶液中和至pH7.0，并以纯化水稀释到5.0ml，离心，吸取上清液，得多糖水解样品。　　2.3衍生物的制备　　2.3.1标准单糖混合液的配制分别精密称取甘露糖（Man）0.0018g及半乳糖（Gal）0.0036g,鼠李糖（Rha）0.0036g，葡萄糖（Glc）0.0039g，葡萄糖醛酸（GlcUA）0.0039g，半乳糖醛酸（GalUA）0.0042g，阿拉伯糖（Arab）0.0030g，置1

7、0ml量瓶中，加水溶解并定容至刻度，摇匀，即得。7　　2.3.2标准单糖混合液的衍生精密吸取单糖混合液50μl，于具塞试管中，分别加入0.3mol·L-1NaOH50μl和0.5mol·L-1PMP甲醇溶液50μl，涡旋混合30s，置于70℃水浴反应30min，冷却至室温，加入0.3mol·L-1HCl50μl进行中和，加入去离子水100μl稀释混匀，然后加入1ml氯仿涡漩混匀30s，静置5min，上层水相再重复萃取2次，经0.45μm微孔滤膜滤过，进样分析。　　2.3.3多糖水解样品的衍生将水解后的大蒜多糖按“2.3.2

8、”项下方法进行衍生化处理，进样时间20s。结果见图1～2。　　2.4线性关系考察取适量标准品混合液按“2.3.2”项方法进行衍生，经0.45μm微孔滤膜滤过，用过滤过的去离子水1∶1稀释，分别进样5.0，10.0，15.0，20.0，25.0s，记录色谱图，进行线性回归。结果见表1。表17种单糖的标准曲