不同时期大蒜中多糖组分c的含量测定

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1、不同时期大蒜中多糖组分C的含量测定作者：余薇王秀红陈凤吴基良闵清【摘要】目的对不同时期的大蒜多糖组分C进行提取纯化并测定其含量。方法用无水丙酮提取的方法分离纯化大蒜多糖组分C，以苯酚-硫酸显色后用紫外分光光度计测定吸光度，测定波长486nm。结果在4.0～10.0μg/ml范围内，浓度与吸光度呈良好线性关系，回归方程A=0.0694C-0.0049(R=0.9996，n＝7)。不同时期的大蒜中多糖组分C的含量：2月份的含量87.82%，4月份的含量88.52%，6月份的含量93.61%，7月份的含量94

2、.28%，11月份的含量85.17%。结论6～7月份大蒜多糖组分C的糖含量最高。【关键词】大蒜多糖组分C苯酚-硫酸法　大蒜为百合科葱属植物生蒜AlliumsativumL．的鳞茎，其性味生辛热、熟辛温，具有温中消食、化肉消谷、解毒除邪、攻冷积和杀虫的功效，作为中药使用已有几千年的历史。我国是世界上最大的大蒜生产国。目前，从天然产物中寻找新的药效成分已成为国际上研究的新动向，多糖的研究颇受关注。多糖是由十个以上单糖通过苷键连接而成的聚糖。它在自然界分布极广，在高等植物、藻类、菌类及动物体内均有存在，是自然

3、界含量最丰富的生物聚合物。大蒜多糖是从大蒜球根中提取的活性成分，本科室通过大量的实验研究发现大蒜多糖具有保肝护肝作用［1，2］、抗病毒［3，4］、保护心肌［5］等作用。大蒜采收期为每年的6～7月份，为了更合理地开发利用，我们对不同时期大蒜中的多糖组分C进行糖含量比较分析，旨在为大蒜多糖C的药效学研究提供基础资料。1器材1.1药材市售山东产大蒜。1.2试剂葡萄糖标准品，上海化学试剂公司；苯酚，上海化学试剂公司；硫酸(分析纯)，上海化学试剂有限公司；95％乙醇；蒸馏水。1.3仪器UV-754型紫外可见分光光

4、度计(澳大利亚VARIAN公司)；TD－II台式低速自动平衡离心机(湖南星科科学仪器有限公司)；FA1104电子分析天平(上海精密科学仪器有限公司)。2方法与结果2.1大蒜多糖组分C的分离纯化新鲜大蒜去皮→碾成蒜泥→无水乙醇浸泡过夜→尼龙布过滤→沉淀用无水乙醇浸泡1h→尼龙布过滤→沉淀用无水乙醇浸泡24h→尼龙布过滤→沉淀（即脱脂蒜泥）用双蒸水溶解→沸水浴8h→冷却→尼龙布过滤→滤液中滴加4～5倍无水乙醇→静置72h→抽滤→滤液68℃水浴约8h蒸出乙醇→滤液中滴加3～4倍丙酮→静置6h→抽滤→得大蒜多糖

5、组分C粗品。粗品Sevage法去蛋白后在55℃下干燥至恒重得大蒜多糖组分C精制品。纯化后得大蒜多糖组分C在紫外可见光谱段进行扫描，结果显示在190nm处有多糖的特征吸收峰，而在260nm和280nm处无吸收，表明大蒜多糖组分C中无蛋白质成分。见图1。2.2溶液的配制2.2.15%苯酚溶液的配制取苯酚100g，加铝片0.2g和NaHCO30.1g，蒸馏。收集180～182℃馏分，精密称取精制苯酚5.0g溶解后转至100ml容量瓶中定容，摇匀，得5%苯酚试剂。2.2.2标准品溶液的制备精密称取105℃干燥至

6、恒重的葡萄糖10.0mg置100ml容量瓶中，加水溶解，稀释至刻度，摇匀即得浓度为100μg/ml的标准品溶液。2.2.3供试品溶液的制备精密称取55℃下干燥至恒重的大蒜多糖组分C5.0mg，置100ml容量瓶中，加双蒸水溶解，稀释至刻度，摇匀即得多糖供试品溶液50μg/ml。2.3检测波长的选择精确量取的葡萄糖溶液、样品溶液1.0ml分置于两支干燥试管中，分别加入5%苯酚溶液1.0ml摇匀，然后加入浓H2SO45.0ml摇匀，另以1.0ml水同上操作，作为空白液，于室温中放置5min，沸水浴中恒温15

7、min，取出，冰水浴冷却至室温，在波长400～800nm之间扫描。结果供试品与标准品溶液在486nm波长处均有最大吸收，而空白溶液在此波长无干扰，故选用486nm为检测波长。见图2～3。2.4标准曲线的测定精密量取标准品溶液0.4，0.5，0.6，0.7，0.8，0.9，1.0ml，分别置7只试管中，各加蒸馏水至1.0ml，再加5％苯酚溶液1.0ml，摇匀后再加入浓H2SO45.0ml，摇匀，室温下放置5min，沸水浴中恒温15min，取出，冰水浴冷却至室温，在486nm处，以蒸馏水管作为空白对照，测定

8、各浓度标准液的吸光度，以糖浓度C为横坐标，吸光度A为纵坐标绘制标准曲线，计算得回归方程A=0.0694C-0.0049(r=0.9996，n=7），在4.0～10.0μg/ml范围内，浓度与吸光度呈良好线形关系。2.5换算因子f的测定精密称取55℃下干燥至恒重的不同时期提取的大蒜多糖组分C10.0mg，置100ml量瓶中，加适量双蒸水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为多糖储备液(100μg/ml)。精密吸取多糖储备液2.0ml,按绘制标准曲线的方